论文部分内容阅读
黄瓜植株茎、叶、卷须、花萼、子房表面均覆有短刚毛,果实均有刺,通过组织学观察,发现黄瓜叶片上的刚毛和果实上的果刺形态结构一样,均为多细胞无腺体的表皮毛。果实是黄瓜经济性状最重要的部分,而果刺是果实外观品质重要的性状。黄瓜EST序列数量的迅速增加为开发新的SSR标记提供了宝贵的数据资源。本论文从GenBank上公布的黄瓜EST序列中检索到902条来自果实的序列,利用SSRIT软件分析得到63条包含SSR的EST序列,设计了37对EST-SSR引物,结果显示有9对引物在7份黄瓜自交系上扩增有多态,占所设计引物总数的24.3%,平均等位变异数为2.1个,7份自交系间C8和S06遗传相似系数最小为0.22。有27对引物在3份甜瓜上有扩增产物,其中1对引物扩增有多态。这为今后黄瓜基因组研究提供了新的标记。利用中国华北类型的黄瓜自交系S94构建了一个BAC文库,该文库包含约19200个克隆,平均插入片段为105 kb,大约覆盖黄瓜基因组的5倍。为了使黄瓜的遗传连锁群锚定其染色体,从黄瓜的7个连锁群共选择了22个标记,其中15个SCAR标记和7个SSR标记。利用这些标记用PCR的方法筛选BAC文库的DNA池,15个标记筛选到至少2个克隆,共筛选到60个BAC克隆,最后确定了22个BAC克隆作为连锁群特异克隆,这个BAC文库的构建为今后黄瓜基因组研究奠定了基础。本论文利用欧洲温室类型自交系S06(母本)与黄瓜无毛(果刺)突变体gl(父本)构建了分离群体。通过F2和BC1群体的遗传分析,结果表明有毛(Gl)为显性,无毛(gl)为隐性,并且果实、茎、叶、等表面的表皮毛性状为一对核基因控制。同时控制果实、茎、叶、表皮毛性状的无毛基因(gl)对控制果瘤性状的果瘤基因(Tu)存在隐性上位作用。用SRAP标记结合BSA法进行黄瓜果刺形成基因的定位,找到两个与Gl连锁的SRAP标记,其中包括一个与Gl基因紧密连锁的标记ME4EM3,连锁距离为3.2cM,并将该标记转化为一个SCAR标记。用这个SCAR标记筛选黄瓜BAC文库,进行了BAC末端测序,为进一步精细定位与分离果刺形成基因奠定基础。为了克隆控制黄瓜果刺形成相关的基因,本论文利用棉花和拟南芥TTG1基因进行同源克隆,得到一个CsTTG1基因。半定量RT-PCR分析表明,该基因在重要的分生组织及器官中都有表达。Southern blot实验表明,该基因在黄瓜中为单基因。功能互补实验表明CsTTG1能互补拟南芥ttg1突变体的表型,这个结果表明,黄瓜TTG1-like基因与拟南芥的TTG1基因功能同源。这有助于我们理解多细胞表皮毛形成的分子机制,也有助于认识黄瓜果刺这个外观品质性状。