【摘 要】
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目的体外培养人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs),探讨ROCK1、NFATc3及miR-153的基因在低氧下人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)表达情况;进一步探讨miR-153是否通过靶向调节ROCK1和NFATc3来抑制低氧所致HPASMCs的增殖和迁移。方法荧光素酶报告分析miR-153对ROCK1和NFATc3的靶向结合关系。进行体外培养HPASMCs,取状态良好的4-6代细胞进行实验。R
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目的体外培养人肺动脉平滑肌细胞（HPASMCs）,探讨ROCK1、NFATc3及miR-153的基因在低氧下人肺动脉平滑肌细胞（HPASMCs）表达情况;进一步探讨miR-153是否通过靶向调节ROCK1和NFATc3来抑制低氧所致HPASMCs的增殖和迁移。方法荧光素酶报告分析miR-153对ROCK1和NFATc3的靶向结合关系。进行体外培养HPASMCs,取状态良好的4-6代细胞进行实验。RT-PCR检测细胞在低氧（3%O2,5%CO2,92%N2）不同时间（0 h、6 h、12 h及24 h）的ROCK1、NFATc3及miR-153的基因表达。进一步,将miR-153 mimic转染至HPASMCs中构建miR-153过表达组（miR-153mimic）,同时,同步转染错义序列同样处理作为阴性对照组（mimic control）;将miR-153 inhibitor转染至HPASMCs中构建miR-153抑制表达组（miR-153 inhibitor）,同时,转染同步转染错义序列作为阴性对照组（Inhibitor control）,将各组低氧12 h。CCK-8实验检测细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力。RT-PCR检测miR-153的基因表达,Western blot检测ROCK1、NFATc3、PCNA、MMP-2的蛋白表达量。结果荧光素酶报告证实在293T细胞中miR-153靶向结合ROCK1和NFATc3（P<0.01）。与对照组细胞相比,低氧处理HPASMCs,ROCK1和NFATc3的基因表达上升（P<0.05）,miR-153的基因表达降低（P<0.05）。与Inhibitor control组相比,miR-153 inhibitor组的细胞检测到细胞增殖活性和迁移能力上升,ROCK1和NFATc3蛋白表达均上升（P<0.05）;与mimic control组相比,miR-153 mimic组的细胞检测到细胞增殖活性和迁移能力下降,ROCK1和NFATc3蛋白表达均下降（P<0.05）。结论低氧可诱导HPASMCs中ROCK1和NFATc3的基因表达上调,miR-153基因表达下调。Mi R-153通过负性调控ROCK1的表达和NFATc3的活化可抑制低氧条件下HPASMCs的增殖和迁移。
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