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目的: 通过三黄茵赤汤预处理LPS/D-GalN致急性肝衰竭小鼠,探讨三黄茵赤汤对急性肝衰竭小鼠肝细胞焦亡的影响,及对Caspase-1的调节作用,揭示三黄茵赤汤对急性肝衰竭发挥抗肝细胞焦亡的分子机制,为三黄茵赤汤治疗急性肝衰竭的药理机制提供新的科学依据。 方法: 第一部分:取80只C57小鼠随机分成5组:生理盐水组,ALF模型组,三黄茵赤汤组,抑制剂组,双环醇组。每组18只,每组取10只做生存率观察,LPS100ug/kg,D-GalN800mg/kg腹腔注射进行急性肝衰竭小鼠造模。三黄茵赤汤组灌胃7天后与模型组、抑制剂组、双环醇组同时造模,抑制剂组以VX-765200mg/kg灌胃,双环醇组同时以双环醇300mg/kg灌胃。6小时后麻醉采血后处死小鼠,收集肝脏组织,肝组织HE染色,电镜观察肝组织细胞超微结果的变化。全自动生化检测仪检测各组小鼠血中ALT、AST、PT、INR含量。qPCR检测NLRP3、Caspase-1mRNA表达。Western Blotting检测NLRP3、Caspase-1、RIP3、MLKL蛋白表达。免疫组化检测NLRP3、MLKL蛋白表达。 第二部分:培养LO2细胞,分成正常组,ALF模型组,三黄茵赤汤组,抑制剂组。10μg/mL LPS联合1.8mg/ml D-GalN处理LO2细胞9h造模,三黄茵赤汤组以2mg/ml生药处理,抑制剂组以30uM VX-765处理。流式细胞术检测焦亡率,Hoechst/PI染色观察细胞形态,Western Blotting检测NLRP3、Caspase-1蛋白表达。 应用SPSS软件,数据用((x)±s)表示,两两比较用t检验,多样本均数比较采用One-Way ANOVA方差分析。P<0.05认为有统计学意义。 结果: 三黄茵赤汤提前干预可提高ALF小鼠的生存率(P<0.05)。肝功能及凝血功能PTIN检测,模型组较正常组显著升高(P<0.05),三黄茵赤汤组较模型组显著下降(P<0.05)。肝脏病理切片经HE染色显示模型组肝细胞坏死,大量炎症细胞浸润和充血;肝脏电镜肝细胞超微结构显示模型组肝细胞膜破损,线粒体轮廓模糊,肿胀,嵴消失或断裂,内质网核糖体脱失,染色质凝集成块。三黄茵赤汤组、抑制剂组及双环醇组的肝细胞损伤病理有所改善。qPCR结果显示:模型组NLRP3及Caspase-1mRNA表达显著增加(P<0.05),三黄茵赤汤组、抑制剂组及双环醇组表达的较模型组下降(P<0.05)。WB结果显示:模型组NLRP3及Caspase-1蛋白表达显著增加(P<0.05),三黄茵赤汤组、抑制剂组及双环醇组表达的较模型组下降(P<0.05)。免疫组化结果显示:LPS/D-GalN处理后6小时,NLRP3蛋白表达量较正常组显著增加(P<0.05),三黄茵赤汤组、抑制剂组及双环醇组较模型组降低(P<0.05)。三黄茵赤汤能够降低LO2焦亡率(P<0.05),改善细胞死亡,降低NLRP3及Caspase-1蛋白表达(P<0.05)。 结论: 1、三黄茵赤汤对小鼠急性肝衰竭有一定疗效。 2、LPS/D-GalN可能导致急性肝衰竭小鼠发生肝细胞焦亡 3、三黄茵赤汤可能通过下调NLRP3、Caspase抑制肝细胞焦亡保护急性肝衰竭小鼠。 4、三黄茵赤汤可能通过下调Caspase-1焦亡相关蛋白抑制肝细胞焦亡死亡,进而防治急性肝衰竭。