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燕子花(Iris laevigata)是东北地区非常珍贵的耐寒宿根花卉。为了在野生资源保护的基础上实现开发利用及开展今后的分子育种研究,建立再生体系是十分有必要的。本文以燕子花种子萌发的无菌幼苗为材料,探究了其诱导增殖、生根、移栽等方法。并分别以燕子花无菌苗的根段、胚轴、叶鞘等为外植体,建立了愈伤组织再生体系。同时,以燕子花胚轴愈伤组织再生体系为基础以及胚轴愈伤为受体,初步探究了农杆菌介导法转化GUS基因的过程,旨在为今后燕子花基因工程育种工作的开展提供参考和依据。研究的主要成果如下:1.采自大兴安岭的燕子花种子,使用不同处理方法发芽率明显不同:于种子采集的当年10月至12月层积沙藏60d(哈尔滨地区自然环境中),发芽率由1.11%提高至38.89%;将种子浸泡在2%NaClO溶液中30min后,燕子花种子发芽率可由1.11%提高为70.00%;层积沙藏后的种子(60d,哈尔滨地区自然环境中)再经过NaClO溶液浸泡处理(2%浓度,30min),种子发芽率可提高至93.33%。2.以燕子花种子萌发的幼苗(2-3片叶)为外植体,建立了不定芽再生体系:种子的最适消毒方法为,将种子浸入洗洁精水中,振荡1min并浸泡10min后,置于流水下冲洗30min,用自来水(室温)浸种24h后,再用75%酒精消毒10s,无菌水洗3遍,再用2%NaClO浸泡25min,无菌水洗5遍,接种5d时更换一次培养皿同时统计污染率为0,20d发芽率为90%,且幼苗后期生长状态良好;燕子花不定芽诱导及增殖的最适培养基为 MS+IBA 0.5mg/L+6-BA 1.5mg/L+NAA 1.0mg/L,诱导率为 73.34%,增殖系数为4.10;生根的最适培养基为MS+NAA 0.2mg/L,生根率为93.33%,生根系数为7.17;燕子花组培苗移栽的最适方法为:在室温下将组培瓶的盖子打开,倒入无菌水(覆盖住培养基表面即可)炼苗3d,再用自来水洗干净根部的培养基,修剪腐烂的根和枯黄的叶片,进行水培20d后,再次修剪枯黄的叶片,最后移栽至黑土:蛭石=3:1的基质中,每2-3天浇水一次,移栽成活率可达90.00%。3.以燕子花根段为外植体建立了愈伤组织再生体系:诱导根段愈伤的培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L+NAA 0.4mg/L,诱导率可达 73.33%。愈伤组织增殖的最适培养基为 MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L,增殖率可达 73.33%。用100mg/L的青霉素G钠抑制燕子花愈伤增殖过程中产生的内生菌,抑菌率最高为46.28%。最适分化培养基为 MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.4mg/L+KT 1.0mg/L,分化率为49.52%。4.以燕子花幼苗的胚轴为外植体建立了愈伤组织再生体系:最适合燕子花胚轴诱导愈伤的琼脂含量为7g/L。燕子花胚轴诱导愈伤的最适培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 1.0mg/L+NAA 0.4mg/L,诱导率为75%;愈伤增殖的培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L;愈伤分化的培养基为 MS+IBA 0.5mg/L+6-BA 1.5mg/L+NAA 1.0mg/L,分化率为 39.72%。5.燕子花的叶鞘诱导愈伤的最适诱导培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 1.5mg/L+NAA 0.4mg/L,诱导率为 76.67%;愈伤增殖的培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+NAA 0.2mg/L;以培养基 MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.4mg/L+KT 1.0mg/L诱导叶鞘愈伤分化,分化率为23.33%。6.培养基 MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L+NAA 0.4mg/L 诱导燕子花新生的根尖长出愈伤,诱导率为80%。在燕子花胚轴诱导愈伤的过程中发现,培养基MS+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L+NAA0.4mg/L能够诱导燕子花幼嫩叶片的刻伤处长出愈伤。7.以燕子花胚轴愈伤组织再生体系为基础以及愈伤组织为受体材料,探究了不同因素对转化效率的影响,初步得出以下结论:最适的Kana筛选浓度为38.21mg/L(半致死浓度)。最适抑菌的Carb浓度为400mg/L,此时长菌率为0。农杆菌介导GUS基因最适侵染时间为3min,抗性愈伤获得率为41.52%。最适共培养时间为2d,抗性愈伤获得率50.00%。