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为了研究褐斑病与蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)根部内生细菌群落结构和多样性的关联,本文从野生蕙兰健康植株和褐斑病植株根部分离出内生细菌112株,健康植株的可培养细菌数量为1.33×105cfu g-1,褐斑病植株的可培养细菌数量为1.21×104 cfu g-1。采用核糖体DNA扩增片段限制性酶切分析(ARDRA)研究了健康植株和褐斑病植株内生细菌多样性与群落结构。将内生细菌纯培养物扩增近全长的16S rDNA,并用ARDRA(amplified ribosomal DNA restriction analysis)对所分离的菌株进行分型,根据酶切图谱的差异,将健康植株中的内生细菌分成8个ARDRA型,褐斑病植株分成13个ARDRA型。并选取代表性菌株进行16SrDNA序列测定。结果表明,健康植株分离出内生细菌6个属,优势菌群为Bacillus;褐斑病植株分离出11个属,优势菌群为Mitsuaria和Flavobacterium。
通过回接蕙兰、鸟舌兰和金边春兰以及初步拮抗实验发现,从褐斑病植株分离出的H5号菌株(Flavobacterium resistens)使蕙兰、鸟舌兰和金边春兰产生病症,而健株中的B02(Bacillus cereus)菌株和B22菌株(Burkholderia stabilis)对H5菌株有拮抗作用。
为了研究蕙兰根部内生细菌群落结构在不同季节里的变化,于不同季节从蕙兰根部分离出内生细菌207株,采用核糖体DNA扩增片段限制性分析(ARDRA),研究了蕙兰根部内生细菌群落组成的季节动态变化。将内生细菌纯培养物扩增近全长的16S rDNA,并用ARDRA对所分离的菌株进行分型,根据酶切图谱的差异,将其分成25个ARDRA型,并选取代表性菌株进行16S rDNA序列测定。结果表明,分离出来的内生细菌分为9个属,包括Bacillus,Burkholderia,Paenibacillus,Pseudomonas,Microbacterium,Rhizobium,Lysinibacillus,Cohnella和Brevibacterium,其中优势种群为Bacillus,次优势种群为Paenibacillus和Burkholderia。冬季蕙兰内生细菌群落结构多样性水平最高,夏季和春季相对较低。不同季节里蕙兰内生细菌群落结构差异极显著(p<0.001),但不同季节中蕙兰根部内生细菌优势种群没有差异。