黔产薯蓣属药用植物资源调查、鉴别及亲缘关系研究

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目的:调查黔产薯蓣属植物的分布及其民间药用情况,利用形态学鉴别、显微鉴别、分子鉴别和傅里叶变换红外光谱鉴别法对部分黔产薯蓣属植物进行鉴别,以期找到薯蓣属植物准确高效的鉴别方法并为薯蓣属植物资源的鉴定、开发和保护提供资料。方法:1.通过实地调查、文献查阅和标本整理的方式对黔产薯蓣属植物的资源分布和民间药用情况等进行研究;2.对11种黔产薯蓣属植物的10个地上部分、4个地下部分的形态特征进行观察研究;3.对11种黔产薯蓣属植物的上、下叶表皮显微特征、地下茎粉末的显微特征进行观察,观察并测量地下茎中淀粉粒的形态和大小;4.利用rbcL、matK、psbA-trnH三个基因片段对12种黔产薯蓣属植物进行鉴别,使用生物信息学软件对三个序列PCR扩增产物的测序结果进行拼接、同源比对,两端齐平后分别建立NJ进化树;5.使用傅里叶变换红外光谱仪对1 1种黔产薯蓣属植物的地下茎粉末进行扫描,得到各个样品傅里叶变换红外光谱图,进行聚类分析。结果:1.薯蓣属药用植物在贵州地区分布较广且以野生资源为主,贵阳和兴义资源最为丰富,黄独分布于42个县区,在地域上分布最广,而无翅参薯仅分布于兴义、从江两个县;2.贵州省各民族对薯蓣属药用植物资源的利用少有文字记载,多是地方习用品,常用于治疗各种虚症、跌打损伤和关节炎等;3.对11种黔产薯蓣属植物进行形态显微实验,发现通过对外观形态和显微的观察可以对薯蓣属植物进行区分,但主观性较强,主成分分析显示上下表皮非腺毛、植株旋性、托叶、导管类型和石细胞是鉴别薯蓣属植物最主要的特征。4.分子鉴别实验表明,12种黔产薯蓣属植物的matK、psbA-trnH、rbcL序列长度分别为1 077~1198 bp、361-414 bp、1 161~1 259 bp,序列总长度在 2633~2848 bp,(G+C)含量在37.23%~38.62%;5.12种黔产薯蓣属植物的psbA-trnH片段显示较高的变异速率,其次是matK片段,变异速率相对最低的为rbcL片段,其中matK序列变异位点347个,占序列总长度的30.0%;psbA-trnH序列含变异位点187个,占序列总长度的44.5%;rbcL序列含变异位点315个,占序列总长度的25.8%;6.三个基因片段中,matK、rbcL序列基本可以满足薯蓣属组间鉴别,但种间鉴别效果不理想,而pabA-trnH则不推荐单独作为研究切入点进行属下分类研究,matK、psbA-trnH、rbcL联合片段的系统进化树分析基本能满足贵州薯蓣属下5组12种的系统分类要求,而对于薯蓣、参薯、褐苞薯蓣这一类DNA条形码序列极为相近的种,需进行进一步的引物筛选及优化;7.薯蓣属周生翅组植物存在物种交错现象,薯蓣与顶生翅组的粘山药、毛胶薯蓣等进化进程和遗传距离较为相近,而褐苞薯蓣、参薯、薯莨与基生翅组、复叶组的遗传距离更为相近;8.11种黔产薯蓣属植物地下茎粉样品的末傅里叶变换红外图谱整体峰形较为相似,但吸收峰强度与位置有差异,在1020cm-1、1078cm-1、1156cm-1附近均具有较为明显的淀粉特征吸收峰,在1640cm-1附近蛋白质的吸收峰更为明显,图谱聚类结果与分子鉴别结果类似,基本可以反映各个种间的亲缘关系远近。结论:本论文明确了贵州省薯蓣属药用植物的分布与民间药用等情况,通过形态特征、显微特征的观察和分子鉴别、傅里叶变换红外光谱法对12种黔产薯蓣属植物进行了种间鉴别,为薯蓣属植物的鉴别和开发提供了研究材料。
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