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乙烯作为植物激素,在植物生长发育过程中起着重要的调节作用。乙烯对植物生长发育过程的影响包括:种子萌发、对茎和根伸长的抑制、开花、衰老和脱落、性别分化、果实成熟、胁迫反应等。目前,乙烯信号转导途径及其调控机理已成为植物分子生物学的研究热点。Potuschak和Guo等同时在拟南芥中发现了两个能与EIN3相互作用的F结构域蛋白,EBF1和EBF2蛋白(EIN3-binding F- box protein)。EBF1的过量表达使植物对乙烯不敏感。相反,带有EBF1和EBF2双突变体的efb1/efb2植株在没有乙烯的情况下却能产生乙烯组成性的反应,并有EIN3蛋白的积累,表明乙烯反应依赖于EIN3蛋白的稳定性。乙烯可以快速提高拟南芥EIN3蛋白水平,在没有乙烯存在的情况下,EIN3蛋白可以迅速通过EBF1和EBF2所介导的ubiquitin/proteasome途径而降解。这表明ubiquitin/proteasome途径通过降解EIN3蛋白而淬灭乙烯信号,从而表现出对乙烯信号的负调节,所以对EIN3蛋白的调控是乙烯信号转导途径的关键步骤。对番茄LeEBF1和LeEBF2基因的研究,将使我们对番茄乙烯信号转导、果实成熟及环境胁迫中防卫反应相关基因调控的机理更加明确,为利用基因工程技术改良番茄等作物提供理论依据。本研究主要取得了以下结果:①通过RACE和RT-PCR方法从番茄中克隆得到LeEBF1和LeEBF2的全长cDNA序列,其长度分别是2866和2891 bp。序列分析表明,它们的开放阅读框分别是1911和1995bp,分别编码637和665个氨基酸残基,在氨基端含保守的F-box区域,在羧基端有14个亮氨酸重复单位。通过BLAST软件和DNAMAN分析表明这两个基因的氨基酸序列同源性高达58.6%,同时与其他物种EBF蛋白的F-box区域同源性达24.4%-73.2%。由此我们推论LeEBF1和LeEBF2可能属于EBF蛋白家族。②Northern杂交结果表明:LeEBF1与LeEBF2在野生型和Nr的幼叶中的表达量均高于成熟叶;在果实发育过程中,LeEBF1与LeEBF2在青果期的表达量相比其他时期要弱。③根据siRNA序列设计要求,构建了LeEBF1与LeEBF2基因的RNAi载体,并转化到了Nr番茄中,得到了10棵转化苗,为进一步研究LeEBF1与LeEBF2基因的功能奠定了基础。