海洋青鳉鱼肝脏对六价铬的解毒与抗氧化防御研究

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近年来,随着工业化进程的深入和沿海城市化的发展,工农业和城市生活污水的排入,导致近海海域铬污染问题日益严重,对海洋生物生存和人类健康造成了危害。海洋青鳉鱼(Oryzias melastigma)因其对水质、环境变化敏感,被广泛应用于海洋污染物的毒理学研究中,是一种新兴的海洋生态毒理学模式生物。为探究海洋鱼类对六价铬暴露的抗氧化防御、解毒机制,本论文以海洋青鳉鱼成鱼肝脏、幼鱼为材料,进行了初步探讨。得到以下结果:  (1)以3月龄海洋青鳉鱼成鱼进行Cr6+暴露试验,试验组Cr6+浓度设置为2.61mg/L、5.22mg/L、10.44mg/L、20.88mg/L、41.77mg/L五个浓度,暴露时间为96h。ICP-MS测定结果显示,在脑、肌肉、骨骼组织中铬的含量在不同暴露浓度下保持恒定,脑组织对铬有8倍以上的富集;肝脏、肠组织中铬的含量随暴露浓度的升高而有规律地升高。  (2)以3月龄成鱼进行Cr6+暴露试验,试验组Cr6+浓度设置为2.61mg/L、5.22mg/L、10.44mg/L,暴露时间为96h。通过测定肝脏组织中GST、CPR解毒酶的活性,发现肝脏细胞激活Ⅱ相解毒酶,且GST活性随暴露浓度的升高而增强。通过测定肝脏组织中总抗氧化能力和GSH/GSSG,发现肝脏细胞启动抗氧化防御。  (3)以3月龄成鱼进行Cr6+暴露试验,试验组Cr6+浓度设置为2.61mg/L,暴露时间为96h。实时荧光定量的结果显示,铬暴露后肝脏中抗氧化酶相关基因Nrf2、 Cu/Zn-sod、 cat转录无显著变化,gpx,gr的转录极显著下调;重金属标志物基因mt和gat2转录极显著上调。  (4)以15日龄海洋青鳉鱼幼鱼进行淡水、半海水、海水、超盐水环境中Cr6+的急性毒性试验,发现Cr6+对幼鱼4种盐度下的LC50-96h分别为:74.73mg/L,68.86mg/L,23.96mg/L、20.20mg/L,表明幼鱼在淡水、半海水中对Cr6+的耐受力比在海水、半海水中强得多。通过对比青鳉属耐盐候选基因nkp,ncp3,fxyd6转录水平上的差异,认为半海水才是海洋青鳉鱼的最适生存环境。  (5)对六价铬胁迫下海洋青鳉鱼肝脏进行了RNA-Seq测序,获得了试验组43,847,878条clean reads,对照组35,186,899条clean reads,初步发现8个显著上调和12个显著下调的转录本。
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