干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)是宿主体内一群数量庞大的抗病毒基因群,胆固醇-25-羟化酶(Cholesterol 25-hydroxylase,CH25H)是一个已被鉴定的ISG基因,然而其抵抗家禽病毒的功能尚不清楚。J亚型禽白血病病毒(Subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)的致病性和传染性远高于其他ALV亚群,给养禽业造成了巨大的损失。因此,筛选鸡体内具抗ALV-J功能的ISGs,研究其抗ALV-J作用机制,对解析宿主的抗病毒机理,选育具有抗病能力鸡品种具有重要的意义和潜在的应用价值。本研究对1天龄雏鸡进行IFNα处理后再感染ALV-J,同时设置单独感染ALV-J以及不做任何处理的空白对照组,结果发现单独感染ALV-J病毒血症S/P值始终高于IFNα+ALV-J组。同时,IFN-α处理与ALV-J感染都可诱导雏鸡体内CH25H和OAS上调表达。此外,本研究进行的细胞实验研究的结果发现经典ISGs如CH25H(6 h),OAS(6 h,24 h),PKR(6 h,24 h,48 h),ZAP(6 h,24 h,48 h),STAT1(6 h,24 h,48 h)和ISG12(6 h,24 h)的表达均可被IFNα诱导上调,推测,鸡IFNα通过诱导ISGs的上调表达而发挥抗ALV-J功能。为了进一步确认这些基因的抗ALV-J功能,过表达CH25H,OAS,PKR,STAT1和ISG12于DF-1细胞后感染ALV-J,CH25H(48 h),OAS(24 h,48 h),PKR(48h),STAT1(48 h)和ISG12(24 h,48 h)时gp85在转录水平的表达显著下调,这些结果说明这5个基因是具有抗ALV-J功能的ISGs。我们进一步选取CH25H基因进行深入研究。结果发现,ALV-J感染鸡DF-1细胞可诱导CH25H在转录水平上调表达。过表达CH25H抑制ALV-J的复制。利用CRISPR/Cas9技术敲除DF-1细胞内源性CH25H,并获得CH25H缺失的DF-1细胞系,结果发现敲除CH25H促进ALV-J复制。CH25H的酶解产物25-羟基胆甾醇(25-hydroxycholesterol,25HC)可抑制ALV-J的复制。此外,将25HC预处理敲除CH25H的DF-1细胞系后感染ALV-J,发现ALV-J的复制受到抑制。综上,CH25H通过催化产生25HC发挥抗ALV-J功能。