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目的：肝癌是世界上最常见、恶性程度最高的恶性肿瘤之一,是我国第二位癌症杀手。尽管手术仍是目前治疗肝癌最有效的方法,但术后高转移复发率已成为进一步提高远期疗效的瓶颈,降低术后复发率成为目前攻克肝癌的关键。甘露糖高表达是肿瘤细胞的重要特点之一,使得肿瘤细胞表面甘露糖成为肿瘤治疗的一个重要靶点。甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂(Pseudomonas aeruginosa mannose sensitive hemagglutination vaccine, PA-MSHA)是一种新型的广谱免疫调节剂,它可以与肿瘤细胞表面的甘露糖特异性结合,发挥抗肿瘤的作用。但其在肝癌中的作用尚待进一步研究。我们前期研究发现PA-MSHA能显著诱导肝细胞肝癌的凋亡并抑制其转移。在此基础上,本研究拟进一步探索PA-MSHA对肝癌细胞周期的作用及其机制,为临床开展应用甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂防治肝细胞肝癌提供理论依据和实践基础。方法：(1)采用人肝癌细胞MHCC97L和HepG2细胞系进行实验,根据实验需要,分为六组,分别为：对照组、甘露糖组(100mM)、灭活的普通绿脓杆菌(PA)组(2×108/m1)、低剂量PA-MSHA组(1×108/m1)、高剂量PA-MSHA组(2×108/ml)和高剂量PA-MSHA(2×108/ml)+甘露糖(100mmM)组。(2)观察指标及方法：体外培养人肝癌细胞株MHCC97L及HepG2,以不同剂量的PA-MSHA作用于肝癌细胞,MTT实验检测PA-MSHA对细胞增殖的影响,流式细胞技术检测PA-MSHA对细胞周期的作用,Western Blot检测PA-MSHA作用前后细胞周期蛋白CyclinD1,细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2),增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期蛋白激酶抑制剂p21和p27的表达情况。结果:(1) PA-MSHA可抑制肝癌细胞的增殖,其作用呈剂量及时间依赖性实验结果显示,与对照组相比,PA对肝癌细胞的增殖无明显影响,差异不具有统计学意义(P>0.05),而PA-MSHA可显著抑制肝癌细胞的增殖,且这种抑制作用随着PA-MSHA剂量的增大及作用时间的延长而增加(P<0.05)。(2) PA-MSHA可诱导肝癌细胞周期阻滞,其作用呈剂量依赖性PA组和对照组对肝癌细胞周期的影响无显著差异,此差异不具有统计学意义(P>0.05)；而与对照组相比,经PA-MSHA处理后的肝癌细胞G0-G1期和G2-M期细胞比例明显增高,而S期细胞比例则显著下降(P<0.05)。且PA-MSHA诱导肝癌细胞周期阻滞的作用呈剂量依赖性,即高剂量PA-MSHA组诱导细胞周期阻滞的作用显著强于低剂量PA-MSHA组(P<0.05)。(3)外源性甘露糖可逆转PA-MSHA对肝癌细胞增殖的抑制作用及其诱导的细胞周期阻滞与对照组相比,外源性甘露糖单独使用对肝癌细胞的增殖和细胞周期无显著影响,差异不具有统计学意义(P>0.05)；但高剂量PA-MSHA+甘露糖组与高剂量PA-MSHA组相比,加入甘露糖后PA-MSHA抑制肝癌细胞增殖的作用与诱导肝癌细胞周期阻滞的作用显著降低(P<0.05),说明PA-MSHA诱导肝癌细胞周期阻滞的作用是通过甘露糖介导的。(4) PA-MSHA可抑制CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4及PCNA蛋白的表达,并促进p21和p27的表达,外源性甘露糖可逆转此作用经PA-MSHA处理后,CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4等细胞周期转换的正向调节因子的表达显著降低,与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)；但细胞周期负向调节因子p21和p27的表达较对照组明显升高(P<0.05)。此外,PA-MSHA处理可降低与细胞DNA合成密切相关的PCNA的表达(P<0.05)。以上作用在高剂量PA-MSHA都较低剂量PA-MSHA明显(P<0.05)。高剂量PA-MSHA+甘露糖组与高剂量PA-MSHA组相比,前组中PA-MSHA对细胞周期相关蛋白CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4及PCNA表达的抑制作用较后组降低；同样,甘露糖也减弱了PA-MSHA对p21、p27的促进作用(P<0.05)。证明PA-MSHA对CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4及PCNA等蛋白的表达具有抑制作用,并对p21、p27的表达有促进作用,且该作用呈剂量依赖性,而外源性甘露糖则可抑制该作用。结论：(1) PA-MSHA通过调控细胞周期相关蛋白来诱导肝癌细胞周期阻滞,抑制肝癌细胞增殖。(2) PA-MSHA对肝癌细胞周期及增殖的作用是通过肝癌细胞表面的甘露糖的介导实现的。(3)由于能够与肿瘤细胞表面的甘露糖发生特异性结合,PA-MSHA可用于肝细胞肝癌的靶向治疗。