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目的通过白介素2(IL-2)联合地塞米松预处理上调体内调节性T细胞(Treg),治疗小鼠的气道过敏性炎症性疾病。通过地塞米松预处理,foxo3a siRNA沉默基因后测定淋巴细胞凋亡率,观察FoxO3a是否在地塞米松诱导的淋巴细胞凋亡中占有重要地位。研究IL-2联合地塞米松上调调节性T细胞的机理。方法a)建立小鼠的气道过敏性炎症性疾病模型,并根据肺泡灌洗液细胞数、细胞因子水平、肺脏病理检测模型是否成功建立。b)不同剂量的IL-2联合地塞米松注射小鼠,后利用流式细胞术检测经过这种处理后小鼠脾细胞中Treg的变化,并观察此种治疗可以维持Treg变化的时间。c) IL-2联合地塞米松处理小鼠后,进行气道过敏性炎症性疾病小鼠模型的造模。并检测经过此种预处理后肺泡灌洗液细胞数、细胞因子水平、肺脏病理的变化。d)相应浓度的地塞米松预处理淋巴细胞悬液,在规定的时间收取细胞利用western blot检测FoxO3a与磷酸化FoxO3a变化情况,而后使用foxo3asiRNA转染,沉默FoxO3a基因后,观察地塞米松诱导的淋巴细胞凋亡率的变化,并观察比较地塞米松敏感与耐药细胞株对地塞米松的反应及FoxO3a和磷酸化FoxO3a表达情况。e)利用磁珠分选出CD4~+CD25~+细胞和CD4~+CD25~-细胞,观察这两种细胞在不同浓度的IL-2存在条件下,对地塞米松诱导的凋亡的反应(检测凋亡率的变化)。并通过western blot分析不同浓度的IL-2存在条件下,地塞米松处理后两种细胞中FoxO3a、磷酸化FoxO3a、Bim的变化。f)利用Akt-Ⅳ抑制剂后,观察磷酸化FoxO3a的变化。并观察使用Akt-Ⅳg)抑制剂后,相应浓度的IL-2,地塞米松处理后两种细胞凋亡率的变化和FoxO3a、磷酸化FoxO3a和Bim的变化。结果1.对BalB/C小鼠致敏和激发后,发现小鼠支气管肺泡灌洗液中总细胞数、嗜酸性粒细胞数增加,IL-4、IL-5量增加,而IFN-γ量减少。小鼠气道过敏性炎症性疾病模型造模成功。2.IL-2联合地塞米松可以上调调节性T细胞,比较适当的剂量为IL-2400000IU每只小鼠,地塞米松的剂量为0.1mg每只小鼠。3.IL-2联合地塞米松处理后,发现再次建模小鼠肺泡灌洗液中细胞数,嗜酸性粒细胞数,IL-4、IL-5明显减少,IFN-γ升高。4.地塞米松的剂量增加,小鼠脾淋巴细胞凋亡率增加,淋巴细胞中总FoxO3a增加,磷酸化的FoxO3a却降低。经过沉默基因FoxO3a后,地塞米松诱导的淋巴细胞凋亡率下降。5.对地塞米松敏感的肿瘤细胞株受到地塞米松作用后,总FoxO3a升高,磷酸化FoxO3a减少,而对地塞米松耐药的肿瘤细胞株在接受地塞米松处理前后变化不大。6.CD25~+Treg相比CD25~-Teff细胞,在合适量IL-2存在下,地塞米松处理后,磷酸化FoxO3a表达更高,凋亡相对减少。7.Akt抑制剂使用后,Treg和Teff中磷酸化FoxO3a表达均受到抑制,此时无论如何改变IL-2的量两种细胞的凋亡率无统计学差异。结论1.IL-2联合地塞米松可以预防小鼠气道过敏性炎症性疾病的发生。2.IL-2联合地塞米松可以上调体内调节性T细胞的比例。3.有活性的FoxO3a在地塞米松诱导的淋巴细胞凋亡中可能占有重要作用。4.CD25分子是否表达可能是在一定量IL-2存在条件下,Treg相比Teff可以免受地塞米松诱导的淋巴细胞凋亡的原因。5.IL-2/IL-2R通路活化后,Akt和SGK可能均磷酸化FoxO3a。