电针“足三里”对2型糖尿病大鼠PDX-1作用机制的研究

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目的:通过观察电针"足三里"穴对2型糖尿病大鼠模型体质量、血糖、血脂、糖耐量、胰岛素、胰岛素敏感性和胰岛形态的影响,并以电针"肾俞"、格列美脲灌胃作为对照来判断其疗效。通过观察干预措施对模型大鼠胰腺PDX-1、胰岛素蛋白和基因表达的影响,试图对针灸作用于2型糖尿病的原理进行初步探讨。方法:以SD大鼠作为研究对象,以高糖高脂喂养4周结合小剂量链脲佐菌素注射复制2型糖尿模型。以正常动物为空白组,将成模动物分为模型组、电针"肾俞"组、电针"足三里"组、格列美脲灌胃组等4组。空白动物不给于干预,模型动物仅做束缚干预,电针"肾俞"、"足三里"以电针干预相应穴位,(2Hz/2mA),格列美脲灌胃组以格列美脲灌胃。所有动物同步干预,每次20min,每周连续6天,共干预4周。干预前测动物体质量、空腹血糖、糖尿量,每周末测动物空腹血糖、体质量、试验结束1日测糖耐量,并计算OGTT曲线下面积,观察动物糖耐量的变化。全部干预结束后将动物麻醉,腹主动脉取血,离心出血清用以检查胰岛素和血脂含量。取胰腺组织用多聚甲醛固定,用HE染色制成切片,来观察胰岛形态,用免疫组化法测PDX-1相对表达量。取胰腺组织用Western Blot法测胰腺中PDX-1、胰岛素蛋白表达量,用RT-PCR法测胰腺中PDX-1、胰岛素mRNA表达量。结果:所有造模动物在造模后体质量急剧下降(P<0.01),电针和格列格列美脲都不能扭转动物的消瘦状态(P>0.05)。血糖方面,造模动物血糖普遍升高,干预一周血糖降低到相当低水平,但仍然高于正常。随后3周血糖又有所升高,第4周末,干预组动物血糖普遍低于模型组,其中电针"足三里"组和格列美脲灌胃组都极显著降低血糖(P<0.01),电针"肾俞"作用不明显。三种干预方式都能极显著地改善模型动物的糖耐量(P<0.01)。电针"足三里"还能对血脂的4项指标都起到干预作用,效果好于电针"肾俞"和格列美脲。三种干预方式对胰岛素分泌无影响,但可以改善胰岛素抵抗。电针"足三里"对于保护胰岛形态作用显著。免疫组化结果显示:电针"足三里"可以提高PDX-1蛋白相对表达量。Western Blot结果显示电针"足三里"和格列美脲能够增加PDX-1和胰岛素蛋白的表达。RT-PCR结果显示电针"足三里"可以提高PDX-1 mRNA,电针"足三里"和格列美脲灌胃对于提高胰岛素mRNA表达作用较好。结论:1.利用高糖高脂喂养联合链脲佐菌素注射建立的2型糖尿模型具有高血糖、低糖耐量、高胰岛素抵抗、高血脂等特征,是研究2型糖尿病的适用对象。2.电针"足三里"可调节2型糖尿病模型大鼠血糖、血脂代谢,改善胰岛素抵抗状态,改善糖耐量,改善胰岛形态,提高胰岛细胞功能。3.电针足三里还能促进胰岛B细胞PDX-1、胰岛素蛋白和mRNA的表达。综上,电针"足三里"干预2型糖尿病的作用在某些方面优于格列美脲,优于电针"肾俞",而这种作用是通过对PDX-1基因和蛋白的调节实现的。
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