背景及目的：成纤维细胞生长因子目前已发现有23个成员,其中FGF13属于FGF11亚家族。FGF11家族成员氨基酸序列与其他家族的FGF间具有不同程度的同源性，但FGF11家族成员既不能分泌至细胞外，也不能激活FGFR。根据是否具有核定位序列，FGF11家族蛋白都可分为A型和B型两种蛋白。近年来，越来越多的研究表明FGF13在神经发育，心脏兴奋传递，癌症等领域中起到重要作用。然而，目前关于FGF13的外源性给药研究较少。为了更好地探索FGF13的生物学活性，本实验建立了FGF13A和FGF13B的大肠杆菌表达系统和柱层析蛋白纯化工艺。此外，研究并探讨了肝素存在时，外源性FGF13蛋白影响NIH3T3细胞增殖的分子机制。这将有助于人们了解外源性FGF13作为一种信号因子，在细胞生命活动以及信号传导机制中的重要作用，为FGF13未来的临床应用提供可能。
　　方法：1：将重组质粒pET3a-hFGF13转化至BL21(DE3)pLysS菌株，筛选出表达量较高的菌株，SDS-PAGE和Westernblotting鉴定目的蛋白。
　　2：将菌体裂解后离心获得含有目的蛋白的上清液，通过SP阳离子交换和肝素亲和两步柱层析方法获得高纯度的目的蛋白。
　　3：将纯化得到的rhFGF13A、rhFGF13B蛋白分别在有肝素和无肝素条件下刺激NIH3T3细胞，采用MTT法检测蛋白对NIH3T3细胞的促增殖作用。
　　4：MTT法分析不同抑制剂对肝素存在时rhFGF13A介导NIH3T3细胞增殖的影响。
　　5：Westernblotting检测与增殖相关蛋白的水平变化，初步探究肝素对rhFGF13A介导的促进NIH3T3细胞增殖作用的机制。
　　结果：1：Westernblotting显示目的蛋白与抗人源FGF13抗体有很好的免疫原性，且条带位置与理论值相当。划平板、挑单菌落，筛选高表达单菌落制备甘油菌-80℃冷冻保存。
　　2：rhFGF13A和rhFGF13B蛋白的理论等电点分别为9.92和9.33，在pH7.5的Tri-HCl缓冲溶液中带正电荷，故可以利用阳离子交换柱（SP）柱上进行初步除杂，并利用rhFGF13蛋白与肝素具有亲和性的特性，进一步肝素亲和柱层析获得了纯度＞95%的目的蛋白。
　　3：纯化得到的rhFGF13A和rhFGF13B在无肝素时均不能刺激NIH3T3细胞的增殖。肝素本身并不能促进细胞增殖，但是rhFGF13A在肝素存在时能够促进NIH3T3细胞的生长，并且这种效果在一定范围内呈现出剂量依赖性；而rhFGF13B则无明显差异。
　　4：MTT结果表明，肝素存在时rhFGF13A介导的促进NIH3T3细胞的生长与FGFR以及ERK蛋白相关。分别使用ERK抑制剂FR180204和FGFR抑制剂BGJ398预处理NIH3T3细胞后，可以明显阻断rhFGF13A对该细胞的增殖作用（肝素存在时）。FGFR1抑制剂AP24534的阻断作用较为微弱，而p38抑制剂SB203580无明显阻断作用。
　　5：Westernblotting结果表明rhFGF13A促进NIH3T3细胞生长时（肝素存在下），ERK蛋白的磷酸化水平明显提高，而MAPK通路的另一个通路蛋白p38的磷酸化水平没有明显变化。用ERK抑制剂FR180204预处理肝素存在时rhFGF13A刺激的NIH3T3细胞，我们发现FR180204显著抑制外源rhFGF13A蛋白活化的ERK。结论：本研究不仅为rhFGF13蛋白的制备提供了有效的方案，而且表明外源的rhFGF13A可以借助肝素激活MAPK/ERK通路促进小鼠成纤维细胞的生长，有助于人们深入的了解FGF13在生命活动调节中的重要作用。