【摘 要】
：
谷氨酸作为一种功能性氨基酸,在维持肠道发育过程中发挥重要作用。为了研究谷氨酸对断奶仔猪肠道发育的影响并探究其作用机制,选取14头28日龄健康、体重相近（7.90±0.50 kg）的三元杂（杜×长×大）断奶阉公猪,随机分为对照组和谷氨酸组,每组7个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂玉米-豆粕基础日粮,添加1.00%玉米淀粉,谷氨酸组饲喂玉米-豆粕基础日粮添加1.00%谷氨酸。预饲期7天（玉米-豆粕基础
【基金项目】
：
广州市科技计划项目（201807010001）； 国家自然科学基金面上项目（31872389）；
论文部分内容阅读
谷氨酸作为一种功能性氨基酸,在维持肠道发育过程中发挥重要作用。为了研究谷氨酸对断奶仔猪肠道发育的影响并探究其作用机制,选取14头28日龄健康、体重相近（7.90±0.50 kg）的三元杂（杜×长×大）断奶阉公猪,随机分为对照组和谷氨酸组,每组7个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂玉米-豆粕基础日粮,添加1.00%玉米淀粉,谷氨酸组饲喂玉米-豆粕基础日粮添加1.00%谷氨酸。预饲期7天（玉米-豆粕基础日粮）,正试期21天。分离血清检测血清氨基酸含量,采集各肠段样品,经4%多聚甲醛和2.5%戊二醛分别固定,通过HE染色和免疫组化等技术检测肠道形态结构和功能相关指标;饲养试验第19天,收集饲料样品及粪便样品,粪便样品加入稀盐酸混匀后保存于-20℃。经Ti O2指示剂法评定谷氨酸对断奶仔猪营养物质表观消化率的影响。收取两组仔猪空肠组织蛋白质样品,同位素标记相对和绝对定量（Isobaric tags for relative and absolute quantification,i TRAQ）分析其差异蛋白质表达及信号通路富集情况。同时分离各组猪的空肠隐窝进行体外三维立体培养,观察类肠团生长情况并统计肠道干细胞扩增为类肠团的生成效率和出芽指数。此外,离体水平上通过添加谷氨酸处理猪空肠上皮细胞系（Intestinal porcine enterocyte cell line,IPEC-J2）及仔猪空肠干细胞,探究谷氨酸对IPEC-J2细胞增殖和肠道干细胞活性以及Wnt/β-catenin信号通路的影响。试验结果如下:（1）与对照组相比,日粮添加谷氨酸可使断奶仔猪平均日增重数值上增加6.6 g（P＞0.10）,对耗料增重比无影响（P＞0.10）,具有增加平均日采食量的趋势（P=0.062）。（2）与对照组相比,日粮添加谷氨酸致血清中谷氨酸含量显著增加21.36%（P＜0.05）,甘氨酸含量显著增加38.72%（P＜0.05）,鸟氨酸增加幅度最大,为57.20%（P＜0.05）。血清脯氨酸含量有增加的趋势（P=0.072）。（3）与对照组相比,日粮添加谷氨酸可使日粮粗脂肪表观消化率显著提高11.58%（P＜0.05）,干物质表观消化率显著提高5.61%（P＜0.05）,粗蛋白质表观消化率显著提高5.43%（P＜0.05）。（4）与对照组相比,日粮添加谷氨酸显著提高断奶仔猪单位长度空肠和回肠重量及其黏膜重量（P＜0.05）,空肠和回肠绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度也显著增加（P＜0.05）;谷氨酸组空肠上皮细胞增殖标志增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、分化标志重组角蛋白质（Keratin 20,KRT20）、各功能细胞标志Villin（绒毛蛋白质,吸收细胞标志）、Chg A（嗜铬粒蛋白质A,肠内分泌细胞标志）、Mucin2（黏蛋白质,杯状细胞标志）及肠道干细胞标志富含亮氨酸重复序列G蛋白耦联受体5（Leucine-rich-repeat-containing G-protein-coupled receptor 5,Lgr5）和B细胞特异性莫洛尼小鼠白血病病毒结合位点1（B cell specific moloney murine leukemia virus insertion site 1,Bmi1）表达量均显著上调（P＜0.05）。（5）iTRAQ蛋白质组学结果表明,与对照组相比,日粮添加谷氨酸显著上调Wnt/β-catenin信号通路,Western blotting进一步证实日粮添加谷氨酸显著上调断奶仔猪空肠组织β-catenin、T细胞因子4（T cell factor 4,TCF4）、c-Myc、Cyclin D1等蛋白质表达水平（P＜0.05）。（6）细胞计数的结果显示,谷氨酸处理IPEC-J2细胞24 h后,其增殖能力显著高于对照组（P＜0.05）,增殖标志Ki67阳性细胞数目显著增加（P＜0.05）;Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白质β-catenin、TCF4、c-Myc、Cyclin D1的表达量显著上调（P＜0.05）。（7）与对照组相比,日粮添加谷氨酸可显著增加干细胞扩增为类肠团的生成效率和出芽指数（P＜0.05）;5 mmol/L谷氨酸处理体外培养类肠团,可显著上调类肠团中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白质β-catenin、TCF4、c-Myc、Cyclin D1的表达水平（P＜0.05）,促进干细胞标志Lgr5和Bmi1的表达（P＜0.05）。结论:谷氨酸可通过激活Wnt/β-catenin信号通路增强猪肠道干细胞活性,促进肠上皮细胞增殖,从而促进断奶仔猪肠道发育,提高养分消化率。
其他文献
近年来,我国奶业飞速发展,为了提高国际竞争力和企业竞争力,如何提高牛奶品质成为研究热点与难点。牛奶中乳脂含量受多种因素影响,其中受日粮影响最大。提高日粮中精料或油脂比例,容易造成乳脂合成减少,严重时引起乳脂降低综合征（Milk Fat Depression,MFD）。关于MFD的发病机制,目前大多数研究聚焦于奶牛瘤胃微生物和脂肪酸的氢化作用,而对肝脏和乳腺在MFD条件下其转录组的变化规律仍不十分清
基因组选择（genomic selection,GS）是动、植物育种的一个重要遗传评定方法。相比传统的最佳线性无偏预测（best linear unbiased prediction,BLUP）方法,GS具有许多优势（如:缩短世代间隔、加快遗传进展等）。在现有的基因组预测方法中,基因组一步法（single-step genomic BLUP,ss GBLUP）可以将系谱、基因型以及表型信息整合到一
禽白血病（Avian leukosis,AL）是我国养禽业目前面临的巨大挑战,造成了巨大的经济损失。先天免疫是机体抵御病原微生物的第一道防线,内源性逆转录病毒（Endogenous retroviruses,ERV）起着调节先天免疫通路的重要作用。本研究以先天免疫为切入点,探究禽内源性逆转录病毒ev-1对鸡感染J亚型禽白血病病毒（Subgroup J avian leukosis virus,AL
母猪的精准定时输精技术（Fixed-time artificial insemination,FTAI）是以外源性生殖激素为基础,来调控母猪的发情与排卵,使其达到发情和排卵的同期化,进而不再需要发情鉴定就进行人工授精的一种新技术。本试验选取了1327头初产母猪,分别研究了PMSG的单位剂量、氯前列醇钠、GnRH的注射时间点、烯丙孕素和X药物对初产母猪繁殖性能的影响,进而为初产母猪精准定时输精程序的
乳头数是保障母猪能够喂养更多仔猪的重要经济性状。母猪的产仔数越多,越需要有足够数目的乳头去供养仔猪。如乳头数不足,则会直接降低哺乳仔猪的日增重、很大程度增加仔猪的断奶前死亡率。为了鉴别影响猪乳头数的主效基因及关键突变,本研究采用猪50K SNP芯片对温氏S21系和S22系杜洛克猪群体共5356头个体进行基因分型,继而采用单标记混合线性模型和4种多标记模型对乳头数开展全基因组关联分析。此前多项研究推
为研究山花黄芩提取物散（绿原酸2.2 mg/g,黄芩苷22 mg/g）作为饲料添加剂的保健作用,以及对其H9N2 AIV和产气荚膜梭菌感染引发疾病的预防和治疗的作用。本试验分为两个部分。第一部分随机选取1日龄的SPF肉鸡随机分为4个处理组,每组3个重复,每个重复6只鸡。Mock为对照组,饲喂基础饲粮;Sh Hq为山花黄芩提取物散组,在基础日粮中按照推荐剂量500 mg/kg的比例添加山花黄芩提取物
本试验旨在探明一种植物精油与有机酸制剂对断奶仔猪生长性能、肠道形态与结构完整性、免疫相关指标等的影响。植物精油与有机酸制剂1和植物精油与有机酸制剂2均采用植物氢化脂肪作为微囊外壳包被（内含柠檬酸、山梨酸、百里香酚以及香兰素,共45%的活性成分。）,但提供方不同。试验选用21日龄断奶仔猪250头,随机分为5组,分别为Base组（饲喂基础日粮）、LA组（饲喂基础日粮+500克/吨植物精油与有机酸制剂1
体细胞核移植技术不仅可以挽救濒危物种,且在农业和医学领域具有重要的应用价值。但是,克隆效率低下一直制约着克隆技术的发展。研究表明,克隆胚胎中Xist基因异常高表达,且X染色体的失活和Xist基因密切相关。在小鼠克隆胚胎中敲除Xist基因或者利用RNA干扰（RNAi）技术抑制Xist基因表达,且RNAi技术联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）,小鼠克隆效率均显著提高。本实验室前期研究发现在猪克隆
本研究主要通过饲养试验探究日粮和饮水添加发酵溶菌酶（fermented lysozyme）对蛋雏鸡生长性能、肠道形态结构、血清生化指标及肠道抗氧化功能的影响,为发酵溶菌酶替代抗生素在蛋雏鸡日粮中的应用提供科学依据。将以720只6日龄健康且体重相近的京粉1号蛋雏鸡随机分为4个组,每组6个重复,每个重复30只蛋雏鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,金霉素组在基础日粮中添加30 mg/kg金霉素,维吉尼
本试验旨在探究瓜尔豆来源的β-半乳甘露聚糖对机体能量代谢相关酶活力和肠道免疫反应的影响。试验首先采用500、1000、2000和4000μg/m Lβ-半乳甘露聚糖处理IPEC-J2细胞,通过测定培养基中还原糖含量和细胞活力,筛选出最佳处理时间和浓度,继而研究1000μg/m Lβ-半乳甘露聚糖对能量代谢相关酶的活力以及细胞因子表达量的影响,初步确定β-半乳甘露聚糖对肠道上皮细胞的影响。为了进一步