【摘 要】
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芪合酶(STS)基因分为两类:白藜芦醇合酶(RS)基因、银松素合酶(PS)基因.该文阐述了RS基因、PS基因研究进展,特别对落花生属、葡萄属、松属等植物克隆的芪合酶基因数目、结构、
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芪合酶(STS)基因分为两类:白藜芦醇合酶(RS)基因、银松素合酶(PS)基因.该文阐述了RS基因、PS基因研究进展,特别对落花生属、葡萄属、松属等植物克隆的芪合酶基因数目、结构、同源性进行比较和分类,分析芪合酶基因的表达、调控、诱导特性;对芪合酶的转基因烟草、水稻、小麦、苜蓿等特征、效应进行讨论.为了对白藜芦醇合酶功能进一步研究,该实验将构建转化双子叶植物的表达载体.研究中使用的花生RS基因已克隆在载体pUCRSH1与pUCRSH2中,分别以pBI与pBI121为表达载体,构建了两个含RS基因的植物表达载体.分别选择合适的限制性内切酶,对表达载体和含RS基因的克隆载体进行酶切,回收片段并纯化,在T4 DNA连接酶的作用下,进行连接、转化,得到重组菌.通过PCR,酶切和序列测定等方式对重组质粒进行检测.构建两个重组表达载体为pBI-RS、pBI121-RS.提取重组质粒,用冻融法把重组质粒转入农杆菌LBA4404的感受态细胞中,经过筛选培养,用mini-Ti质粒提取方法提取农杆菌质粒,经过PCR检测,确定含RS基因的重组表达质粒已经转入农杆菌中.通过黄瓜离体再生体系的研究,对可能的影响因素:黄瓜的消毒、外植体选择、生长调节剂、不定芽的分化和抗性筛选等方面进行探索,建立了高效、便捷的离体再生体系.用含重组质粒pBI-RS、pBI121-RS的农杆菌LBA4404侵染双子叶植物黄瓜的外植体,进行黄瓜转基因的初步研究.
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