背景:人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是人类疱疹病毒β亚科,是目前唯一被证明具备编码micro RNA（miRNA）能力的β疱疹病毒。研究表明这些发挥转录后调控作用的miRNA与HCMV病毒复制、免疫逃避及潜伏感染等生物学过程密切相关。本研究以HCMV编码的miR-US33-5p为研究对象。前期工作通过Hybrid PCR方法筛选并识别出HCMV UL16基因是miR-US33-5p的候选靶m RNA之一,并通过双荧光素酶报告基因系统证实HCMV miR-US33-5p能有效下调HCMV UL16基因的3’-非编码区（3’-UTR）的荧光值。HCMV UL16基因编码一种在病毒感染的宿主细胞表面产生的糖蛋白,该糖蛋白与人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因B（major histocompatibility complex class I-related chain B,MICB）以及UL16结合蛋白（UL16 binding protein,ULBP）在细胞内质网结合形成稳定复合物,抑制自然杀伤细胞（nature killer,NK细胞）的功能。目的:本研究旨在探究HCMV microRNA-US33-5p是否靶向调控UL16基因表达,为进一步研究miR-US33-5p通过调控UL16基因表达发挥的生物学功能、了解HCMV感染的分子机制以及研究抗HCMV感染的靶向治疗等提供依据。方法:1、通过PCR方法获得带有c-Myc标签的HCMV UL16基因,将其构建至pBI-CMV2载体中,构建pBI-UL16重组质粒;2、通过lipofectamine 3000转染试剂将pBI-UL16重组质粒分别与miRNA-US33-5p mimics、miRNA-US33-5p mimics NC转染到HEK-293细胞中;3、通过实时荧光定量PCR方法（q RT-PCR）检测转染后miRNA-US33-5p的表达水平;4、对转染后HEK-293细胞中的c-Myc-UL16蛋白表达量进行Western blot定量分析;5、利用人工细菌染色体构建miR-US33基因缺失病毒株,制备miR-US33特异性Kan抗性基因片段和感受态E.coli DY380-Han-BAC,将Kan抗性基因片段代替目的片段,挑取PCR鉴定阳性的单克隆菌落抽提Han-ΔmiR-US33-BAC质粒,电转人胚肺成纤维细胞（HELF）,常规培养。结果:1、成功构建pBI-UL16重组质粒,UL16基因的体外表达;2、利用瞬时转染技术,构建miR-US33-5p的过表达,q RT-PCR检测转染miRNA-US33-5p mimics后细胞中miRNA-US33-5p的表达均显著升高（P<0.0001）;3、Western blot结果表明,与转染mimics NC组相比,转染mimics 50n M组和mimics 100n M组中c-Myc-UL16蛋白表达均有显著下降（P<0.05、P<0.01）;4、HCMV miR-US33基因缺失株未产生绿色荧光蛋白。结论:人巨细胞病毒miR-US33-5p的过表达降低HCMV UL16蛋白表达。