论文部分内容阅读
个体间药物响应的差异性长期困扰着临床,不同病人对同样剂量的同种药物所表现出的疗效和毒副作用往往不同。药物基因组学研究表明,基因多态性对个体药物响应差异起主导作用。伴随药物基因组学的深入研究,药物基因组生物标记物也不断被发现。基因检测是实现个体化用药的重要手段,通过检测相关基因多态性,可指导临床个体化用药,从而提高药物疗效和降低药物不良反应。本文将多色探针熔解曲线分析技术用于药物代谢酶基因CYP2D6、DPYD,药物转运体基因SLCO1B1,药物作用靶点基因ADRB1、APOE、ANKK1、IFNL3的多态性检测,以期为临床相关基因多态性的检测提供低成本、低耗时、高准度、高通量的检测方法。第一章,分别概述了药物基因组学、基因多态性及其导致药物响应个体差异性的机制,介绍了目前主要的基因多态性分析方法及本论文所基于的技术平台,并比较了各自的优缺点。最后,提出本研究的目的、内容和意义。第二章,首先概述了药物代谢酶CYP2D6基因相关背景和临床意义,并总结了 CYP2D6基因多态性的检测研究进展。随后,本章详细阐述利用多色探针熔解曲线分析技术进行CYP2D6基因多态性检测的研究过程。本研究以CYP2D6的 13 个 SNPs（single nucleotide polymorphisms,SNPs）和 1 个缺失型等位基因为检测对象,建立了四个多色探针熔解曲线分析反应体系,实现对*2、*3、*4、*5、*6、*7、*9、*10、*11、*12、*14、*15、*35、*41共 14 种等位基因的同时检测。其中,针对13个SNP的检测,采用三个基于“多色探针熔解曲线分析技术（Multicolor Melting Curve Analysis,MMCA）”反应体系;针对 1 个缺失型等位基因的检测,采用一个基于“相似序列-多色探针熔解曲线分析技术（Segmental Duplication-Multicolor Melting Curve Analysis,SD-MMCA）”的反应体系。两种类型的反应体系,MMCA和SD-MMCA,检测限分别为300 pg/反应和3 ng/反应。之后,本研究收集570份来自厦门市中心血站的血液样本对CYP2D6基因多态性检测体系进行验证,并选择长程PCR（Long PCR,LPCR）技术作为对照检测方法。结果显示,570份样本中,568份样本的检测结果均与对照方法完全一致。结果不一致的2份样本进一步通过数字PCR（digital PCR,dPCR）技术进行第三方检测,dPCR的检测结果与本研究中建立的检测体系检测结果一致,表明本研究检测技术的准确性。最后,通过对570份标本的检测结果统计分析,计算出各等位基因频率及对应的代谢表型在厦门地区的发生率,为基于CYP2D6基因多态性的临床个体化用药提供依据。第三章,首先概述了相关药物代谢酶、药物转运体和药物作用靶点的多态性背景,随后以 6 种基因（DPYD、SLCO1B1、ADRB1、APOE、ANKK1、IFNL3）的 8 个多态性位点（rs3918290、rs4149056、rs1801252、rs1801253、rs7412、rs429358、rs1800497、rs12979860）为研究对象,利用MMCA技术,针对每种基因分别建立了单管多态性检测体系,六管MMCA检测体系的检测限均为300 pg/反应。最后,将各体系分别对来自厦门市中心血站的标本进行了检测,检测结果均与对照方法测序结果完全一致。对标本的检测结果统计表明,各位点的突变频率均与文献报道相符。