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我国胃癌发病率仍然居所有癌肿的第一位,死于胃癌人数约占全球该病死亡总人数的1/4。多数患者为进展期晚期胃癌,手术根治率低,术前术后放化疗效果差,毒副作用大,至今没有统一的化疗方案,因而肿瘤的基因治疗有望成为一种新的治疗策略。细胞的失调控的异常增殖和凋亡的抑制是肿瘤发生的重要环节。Cdx2是最近发现的特异性核转录因子,最早由Mlodzik于果蝇中分离成功,发现与parahox家族呈高度的同源性。在正常生物发育过程中,Cdx2对消化道特别是结肠和小肠上皮的发育起着关键的作用。研究发现,Cdx2基因过表达可抑制结肠癌的侵袭和转移。关于E2F-1基因,最初被认为是一致癌基因,因为它通过刺激细胞周期从G1期向S期转变的基因表达,可以促进细胞的增殖。并且E2F-1的过度表达可以刺激静止期细胞向S期转变。此外,在HNSCC细胞株中,E2F-1的过度表达可以刺激细胞重新进入细胞周期,并增加细胞的侵袭力,这些表明E2F-1在细胞周期的进展和转移中起到致癌基因的作用。另一方面,在多种细胞中,过度表达E2F-1可以诱导细胞凋亡,表明是一种抑癌基因。而且,最近研究,敲除E2F-1基因的小鼠也表明了其抑癌基因的作用。本研究拟通过体外实验,探讨Cdx2和E2F-1基因对胃癌细胞生物学性状的影响,分析Cdx2和E2F-1基因在胃癌发生发展中的可能作用。1方法1.1瞬时转染胃癌细胞并鉴定Cdx2和E2F-1基因的表达利用脂质体Lipofectamine 2000瞬时转染MGC-803胃癌细胞,抽提转染48h后细胞总RNA和蛋白,通过RT-PCR和Western blot检测Cdx2和E2F-1在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况。1.2转染后的体外实验实验分三组,取48h转染pCMV-Cdx2-HA和pCMV-E2F-1-HA细胞为实验组,转染pCMV-HA和未转染MGC-803分别为空白对照组和阴性对照组。鉴定转染Cdx2和E2F-1成功的MGC-803细胞分别做侵袭实验、粘附实验、划痕实验、克隆实验和测定细胞凋亡率。2结果2.1瞬时转染后应用RT-PCR和Western blot分别检测到了Cdx2和E2F-1基因的表达。2.2转染pCMV-Cdx2-HA质粒的MGC-803细胞的侵袭力、粘附能力、迁移能力和增殖力较转染pCMV-HA质粒的MGC-803细胞和未转染的MGC-803细胞明显降低(P＜0.05),而且调亡率升高(P＜0.05)。转染E2F-1的MGC-803细胞的侵袭、迁移能力和增殖能力降低(P＜0.05),而粘附能力未见明显变化(P＞0.05)。3结论Cdx2和E2F-1高表达对人胃癌细胞MGC-803的生物学特性有较大的影响,具有抑制其侵袭转移的作用,且Cdx2有促进细胞凋亡的作用。