甜樱桃核化学成分及生物活性的研究

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甜樱桃(Pruns avium),为蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus L.)樱亚属(Cerasus Pers)的落叶果树,原产于欧洲,在我国中部和北部地区都有种植。甜樱桃的果实鲜美多汁,具有调中补气、祛风湿的功效。甜樱桃的果实、树根、树枝、树叶、甜樱桃核均可入药,随着甜樱桃种植面积的不断扩大,合理开发这一树木资源意义重大。本论文主要对甜樱桃核进行了各萃取相分离,得到甜樱桃核的粗提物及正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水等萃取相。接着利用核磁共振波谱(NMR)和质谱(MS)技术对甜樱桃核正丁醇萃取相中的单体化合物进行了结构鉴定,并从抗氧化性和抑菌活性两方面对甜樱桃核粗提物、各萃取相及单体化合物进行生物活性评价。测定其粗提物中总多糖、总单宁、总黄酮和总多酚的含量,并对甜樱桃核中脂肪酸成分和挥发性成分进行了提取及分析。最后,对甜樱桃核中总黄酮的提取工艺进行优化。甜樱桃核经95%乙醇常温浸提,得到粗提物。粗提物经正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇四种有机溶剂萃取得到一系列不同极性的萃取相,正丁醇萃取相经柱色谱和薄层色谱分离纯化得到三种单体化合物,经核磁共振波谱和质谱表征,确定单体化合物分别为咖啡酸(Caffeic acid)、芦丁(Rutin)和芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside)。采用.紫外可见分光光度法对甜樱桃核粗提物进行含量测定,得到粗提物中总多糖、总黄酮、总单宁和总多酚的含量分别为7.41%,8.98%,5.07%和13.82%。采用索氏抽提法提取后甲酯化,对脂肪酸成分用GC-MS进行化学组成分析,鉴定出22种脂肪酸甲酯物质。采用水蒸气蒸馏法提取挥发性成分,后经GC-MS进行了成分分析,得到出21种化合物。抗氧化活性评价采用清除DPPH自由基和清除ABTS自由基两种体外抗氧化活性评价方法。结果显示,甜樱桃核的乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相及部分单体化合物(咖啡酸和芦丁)清除效果较强,而正己烷萃取相和水萃取相清除效果较差。在一定浓度范围内,呈现良好的剂-效关系。抑菌活性的评价采用牛津杯法,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌为实验菌种。结果表明,在本实验浓度范围内,乙酸乙酯萃取相抑菌活性较强,二氯甲烷萃取相、正丁醇萃取相、粗提物抑菌活性次之,正己烷萃取相和水萃取相的抑菌活性较弱,几乎没有表现出抑菌活性。采用单因素实验结合响应曲面法建立模型对总黄酮提取工艺进行优化。试验结果考虑到实验操作和实验仪器的局限性,修正后的最佳工艺条件如下:提取温度96℃,乙醇浓度60%(v/v),液料比30:1ml/g,提取时间2.4h。该工艺条件下甜樱桃核总黄酮实际得率9.4 mg/g,与理论值较吻合,说明该模型有较好的实验价值。
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