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目的:研究I-msAg负载的慢性乙肝患者外周血单核细胞来源的DCs(Dendriticcells,DCs)对自身Thl细胞分化的诱导作用。
方法:采用Ficoll密度梯度离心和贴壁法分离慢性乙肝患者外周血单核细胞,以rhlL-4(50ng/m1)+rhGM-CSF(100ng/m1)的完全培养基诱导DCs,实验共分四组:对照组(IL-4+GM-CSF培养体系)、IFN.γ组(IL-4+GM-CSF+IFN.Y培养体系)、HBsAg组(IL-4+GM-CSF+HBsAg)和IFN.Y+HBsAg组(IL-4+GM-CSF+IFN-Y+HBsAg)。用流式细胞术检测各组DCs表面CD80、CD86、CD40、HLA-DR分子的表达情况,CCK-8法检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA法测定DCs培养液上清中IL.12的水平。免疫磁珠分选慢性乙肝患者外周血CD4+T细胞,将在不同的培养体系下诱导成熟的DCs分别与患者自身的CD4+T细胞共培养。细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测共培养后CD4+T细胞内特征性细胞因子IFN-Y/IL-4;同时用ELISA法检测共培养上清中IFN-Y和IL-4的水平。
结果:与对照组相比,HBsAg组、IFN-γ组和HBsAg+IFN-Y组培养第八天的DCs表面表达CD80、CD86、CD40和HLA-DR分子水平较高;刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力较强;DCs分泌的上清液中,IL.12水平也较高。与对照组相比,HBsAg组、IFN-γ组和HBsAg+IFN-Y组DCs与自身Th细胞共培养后,Till细胞占CD4+T细胞的百分比较高,Th2细胞占CD4+T细胞的百分比较低,共培养上清中,IFN.Y的水平较高,IL-4的水平较低。而且,这些都以HBsAg+IFN-γ组最为明显。
结论:慢性乙肝患者单核细胞来源的DCs经HBsAg负载后,功能明显改善,能够有效促进特异性Thl细胞分化,与IFN-γ联合诱导则作用更显著。提示,经HBsAg负载的DCs可以改善患者体内因DCs功能低下而引起的Thl细胞分化不足的状态。