农杆菌介导的铁贮藏蛋白基因转化翠冠梨的研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lxkeinsun
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本研究建立了翠冠梨(Pyrus pyrifolia ‘Cuiguan’)的高效再生和遗传转化体系并通过农杆菌介导法将菜豆铁贮藏蛋白基因转入翠冠梨中,获得了含有铁贮藏蛋白基因的梨新品质。研究结果如下: 1.在外植体接种中培养基中添加0.1g·L-1抗坏血酸,并结合接种前九天每三天一次更换培养基,能有效的防止外植体褐变。 2.研究了翠冠的高效扩繁体系,结果表明AS是比MS更适合翠冠的基本培养基,在AS中添加NAA 0.1mg·L-1和BA 1.0mg·L-1能达到5倍的扩繁系数,芽的向上生长量平均为4.83cm,且植株无玻璃化现象。 3.通过研究基本培养基的类型、激素种类和浓度、暗培养时间、叶片节位、叶片放置方式等因素对翠冠叶片再生频率的影响,发现用第2、3、4节位的叶片,在含TDZ1.5mg·L-1、IAA 0.3mg·L-1的NN69培养基上,经过21d左右的暗培养后光照培养,翠冠梨叶片再生频率达88%。 4.通过对叶片预培养时间、侵染时间、共培养时间、抑菌素种类和浓度、延时筛选时间、不同选择压等遗传转化影响因素的研究,建立的翠冠梨遗传转化体系为:叶片黑暗预培养3d,经农杆菌侵染3min,在含TDZ 1.5mg·L-1,IAA 0.3mg·L-1的NN69培养基上黑暗共培养3d,然后加250mg·L-1Cef黑暗维持培养3d,再进行Km7.5mg·L-1的选择压黑暗培养至抗性愈伤出现;转为光照条件1.2次的继代筛选,获得抗性芽后,进行扩繁 5.实验获得了5株具有卡那霉素抗性的翠冠梨转化植株,经GUS检测,其中3株为阳性,待进一步检测。
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