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阿片与阿片受体系统通过与其他递质系统相互作用影响动物的学习记忆能力。随着年龄增长,阿片递质系统会发生一系列改变,其中主要以阿片受体密度改变表现得最为明显。以Alzheimer’s病为代表的老年痴呆是威胁老年人身心健康的主要疾病之一,其主要的临床表现是进行性学习记忆减退直至死亡。Alzheimer’s病患者的阿片受体系统发生了明显改变。阿片和阿片受体系统必然参与了与年龄相关的学习记忆减退过程。因此,调控阿片与阿片受体系统可能会改善与年龄相关的学习记忆减退。 纳洛酮是一种合成的、经典的非选择性阿片受体拮抗剂,同时它又具有广谱的药理作用。纳洛酮可以改善Alzheimer’s病患者的一些临床症状,参与阿片系统可塑性的调节,并且还能够调节胆碱能递质系统的功能。目前的研究还发现纳洛酮能够通过抑制超氧化物的形成对神经系统起到保护作用。但目前关于纳洛酮是否能够改善年龄所致的学习记忆减退的研究尚未见系统报道。因此本研究以自然衰老的学习记忆减退雌性大鼠为实验模型,首次观察了纳洛酮对其空间学习记忆能力的影响。并在此基础上研究纳洛酮对老年学习记忆减退大鼠海马神经元结构的影响;观察了纳洛酮对海马超氧化物歧化酶活性和乙酰胆碱合成酶的调节作用;结合离体海马脑片电生理实验观测纳洛酮对海马神经元突触可塑性的影响。本研究首次探索了纳洛酮对衰老所致的学习记忆减退的影响,从调控阿片受体的角度来调节与年龄相关的学习记忆减退现象。首次证明了纳洛酮能够提高老年学习记忆减退大鼠胆碱能递质系统和SOD抗氧化系统的功能,从而提高海马的功能。本研究的主要目的是为纳洛酮应用于治疗老年痴呆所致的智能障碍提供一定的实验基础和理论依据。 勿浴刃对宕年学习过柱腻追大8肘彦功及真翔会生匆学扰货肘新穷 材料与方法 一、实验材料 1.实验动物: 6月龄清洁级雌性青年 S…Alaw咖SD)大鼠 22只,体重 250土 10克。24月龄清 洁级雌性老年SD大鼠66只,体重250土10克。 2.实验试剂: 盐酸纳洛酮注射液(NlOXOllC HyrOCNOddC ijCMOll人商品名:金尔伦,兀1山血m Blue O,饿酸,醋酸双氧铀,抗ClliMx抗体,SABC(标记链酶亲和素一生物素一过氧化 物复合物)试剂盒,超氧化物歧化酶昭OD)测试盒。 3.实验仪器: PD.5微电极拉制器(日本成茂);SEN7203三路电子刺激器(日本光电);MEN 一83们微电极放大器(日本光电);ss.Zu隔离器(日本光电);vC.u型记忆示波器(日 本光电);PC—SN微电极推进器(日本成茂);日立H300型透射电镜;可见光分光光度计; HPIAS—1000图象分析仪。 二、实验方法 1.实验动物模型建立 以青年SD大鼠的MomS水迷宫成绩作为参考值,将24月龄老年雌性SD大鼠分为 老年学习记忆正常大鼠和老年学习记忆减追大鼠。 2.MhS水迷宫成绩测试 实验动物分为青年组、老年学习记忆正常组、纳洛酮处理组、生理盐水对照组。检 测纳洛酮处理后,以及纳洛酮处理前后实验动物的MWM成绩,观察纳洛酮对老年学习记 忆减退大鼠空间学习记忆能力的影响。 3.海马Nissl染色 实验动物分为老年学习记忆正常组、纳洛酮处理组、生理盐水对照组。将大鼠左侧 脑组织至于旱%多聚甲醛溶液中固定 24小时后,常规石蜡包埋。每只动物等间隔取四张厚 6微米的矢状面切片。切片采用NISsl染色。 4.海马CA、CA3区超微结构的改变 将大鼠海马,迅速置2%预冷的戊二醛溶液中固定。将海马切成CA、CA3微小组 4 汹兴丈学厦学虏浴士学泣衫卫 织块,饿酸固定,脱水,树脂包埋,超薄切片,醋酸双氧铀染色,透射电子显微镜观察。 5.海马组织SOD活性测定 实验动物分为青年组、老年学习记忆正常组、纳洛酮处理组、生理盐水对照组。将 海马组织置于预冷的匀浆液中制备成2%的海马匀浆液,提取上清液。可见光分光光度计 方法测定海马匀浆SOD活性。 6.脑组织石蜡切片ChAT活性的测定 实验动物分为纳洛酮处理组和生理盐水对照组。将大鼠左侧脑组织至于一%多聚甲醛 溶液中固定24小时后,常规石蜡包埋。每只动物等间隔取四张厚4微米的矢状面切片。 切片用SABC法进行免疫组织化学反应。 7.离体海马脑片Scllan:er侧枝至CAI区Lh的检测 实验动物分为老年学习记忆正常组、纳洛酮处理组、生理盐水对照组和空白对照组。 实验时将刺