敲低SAA基因表达对鼻咽癌CNE2细胞生长及凋亡的影响

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目的:利用shRNA技术沉默血清淀粉样蛋白A(SAA)表达,检测该基因表达降低对人鼻咽癌CNE2细胞生长及凋亡的影响,为揭示SAA基因表达功能提供实验依据。方法:采用shRNA技术,构建3组针对SAA基因的shRNA真核表达干扰载体,并进行测序及blast对比鉴定;将shRNA真核表达干扰载体瞬时转染人鼻咽癌CNE2细胞,通过PT-PCR及Western-blotting技术,筛选出有效的小干扰RNA(siRNA)序列;利用shRNA技术和高表达载体分别沉默及过表达SAA基因,分别瞬时转染CNE2细胞后,检测及验证该基因在CNE2细胞中的表达水平;运用MTT及Hoechst33258荧光染色技术,观察及分析SAA基因的表达对CNE2细胞的生长及凋亡的影响。结果:成功构建针对SAA基因的shRNA真核表达干扰载体组,经测序鉴定、blast对比、 PT-PCR及Western-blotting检测,确定pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482为针对SAA基因设计的最有效的干扰RNA。将pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482和pCD3.1(+)-SAA瞬时转染人鼻咽癌CNE2细胞,PT-PCR及Western-blotting结果显示:pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482真核干扰载体可有效沉默CNE2细胞中的SAA蛋白,pCDNA3.1(+)-SAA真核过表达载体可有效地过表达SAA蛋白,且其结果具有统计学意义(P<0.05);MTT及Hoechst33258荧光染色技术结果显示:SAA基因表达降低可促进CNE2细胞凋亡,增高可促进CNE2细胞生长。结论:1、 pGPU6/GFP/Neo-SAA-homo-482真核干扰载体可有效沉默CNE2细胞中的SAA蛋白;2、 SAA基因沉默可促进CNE2细胞凋亡,SAA基因高表达可促进CNE2细胞生长。
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