【摘 要】
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目的:检测泛素连接酶UBE3C在子宫内膜腺癌中的表达;探讨雌激素处理对ERα阳性子宫内膜癌细胞中UBE3C表达的影响;明确UBE3C在雌激素促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、上皮间质转
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目的:检测泛素连接酶UBE3C在子宫内膜腺癌中的表达;探讨雌激素处理对ERα阳性子宫内膜癌细胞中UBE3C表达的影响;明确UBE3C在雌激素促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、上皮间质转化中的作用及机制。方法:免疫组化法检测UBE3C蛋白在子宫内膜腺癌及正常子宫内膜组织中的表达;Western Blotting检测UBE3C蛋白在不同子宫内膜癌细胞株中的表达;免疫荧光法明确UBE3C在细胞内的定位。雌激素处理ERα阳性Ishikawa细胞,q RT-PCR及Western Blot检测雌激素对UBE3C m RNA及蛋白表达的影响。si RNA干扰沉默UBE3C在Ishikawa细胞中表达,同时使用雌激素刺激并设立对照,划痕试验和Transwell侵袭实验检测UBE3C对Ishikawa细胞迁移和侵袭能力的影响。Western Blottingt检测UBE3C干扰及Wnt信号通路抑制剂DKK1处理后对上皮间质转化相关标志分子及Wnt/β-catenin通路相关分子表达的影响。结果:(1)UBE3C在子宫内膜腺癌组织中高表达,在正常子宫内膜组织中低表达;UBE3C蛋白在子宫内膜癌细胞株中的表达明显高于正常子宫内膜上皮细胞及间质细胞;UBE3C在胞核及胞浆中均表达。(2)雌激素处理能上调Ishikawa细胞UBE3C的表达,在一定范围内呈剂量及时间依赖效应。(3)划痕试验及Transwell侵袭实验结果表明雌激素刺激能促进Ishikawa细胞的迁移、侵袭能力,干扰UBE3C的表达,细胞迁移及侵袭能力明显受到抑制。(4)雌激素刺激能上调snail、slug及间质标志蛋白N-cadherin的表达,下调上皮标志蛋白E-cadherin的蛋白水平。沉默UBE3C后,上皮标志蛋白E-cadherin蛋白表达水平升高,snail、slug及间质标志蛋白N-cadherin表达下降。干扰UBE3C能显著抑制雌激素诱导的上皮间质转化。(5)沉默UBE3C的表达,β-catenin及p-GSK3β蛋白表达下降,总GSK3β蛋白表达不变;加入Wnt信号通路抑制剂DKK1后,上皮标志蛋白E-cadherin表达升高,snail、slug及间质标志蛋白N-cadherin蛋白表达水平降低,提示UBE3C能通过Wnt/β-catenin通路调控子宫内膜癌细胞的上皮间质转化。结论:泛素连接酶UBE3C在子宫内膜腺癌中高表达;雌激素能上调ERα阳性子宫内膜癌细胞Ishikawa中UBE3C的表达;UBE3C介导雌激素诱导子宫内膜癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化。UBE3C能通过Wnt/β-catenin通路诱导Ishikawa细胞发生上皮间质转化。
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