该项目所建立的呼吸道病毒快速诊断方法,将多重RT-PCR和酶联分子杂交(EHA)技术相结合,通过一次实验快速、特异地检测临床标本中呼吸道合胞病毒A和B、流感病毒A和B、副流感病毒1、2、3型7种病毒的RNA.实验所用引物和探针是根据每种病毒的高度保守序列设计的,用6对半引物对临床标本进行扩增.该研究通过插入病毒保守序列片段的重组质粒的体外转录的RNA作为阳性对照.该研究所建立的检测方法将RT-PCR技术与分子杂交技术相结合,整个实验可以在8-10小时完成,该方法大大提高了检测的敏感性,并且微孔板核酸杂交有利于实验检测高通量化,使该检测方法除适用于日常临床检测外,还可用于大规模人群流行病调查.用RT-PCR-EHA方法对收集的儿科呼吸道感染的74个临床标本进行检测,并将检测结果与病毒分离、红细胞凝集试验、细胞中的试验和间接免疫荧光方法相比较.RT-PCR-EHA方法测出47个感染流感病毒A的阳性样本,其余27个样本对这七种病毒呈阴性反应;我们对47个流感A型阳性样本用病毒分离及上述病毒学免疫学试验进行确诊,其中24个样本验证为流感病毒A型感染,而RT-PCR-EHA阴性的27个样本病毒分离结果均为阴性.通过与传统检测方法相比较,可以看出该研究所建立的呼吸道病毒快速分子诊断方法,具有高敏感性和特异性.该方法在今后的工作中,经过实验试剂国产化、定量化等实验条件调整后,可以发展成为实用、有效的临床呼吸道病毒感染的快速诊断方法和大规模分子病毒学流行病调查的手段.