铜绿假单孢菌Ⅲ型分泌系统调控机制的研究

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本文对铜绿假单孢菌Ⅲ型分泌系统调控机制进行了探讨。文章研究了TTSS中的popN基因的功能,发现popN突变子在不同培养基中TTSS的分泌水平存在着显著差异,影响对popN基因的功能的判断。分析了造成表型差异的可能因素,确定蛋白酶对TTSS分泌蛋白的降解作用,是表型差异存在的主要原因,从而首次系统地阐明popN突变子在不同培养基中,都具有TTSS组成型表达的表型,对于深入研究TTSS的调控机制具有重要意义。本研究采用转座子mariner,构建PAO1菌株的转座子文库,在特定条件下,筛选TTSS表达水平增高的菌落。提取突变子的染色体DNA,用限制性内切酶消化后,分别克隆到载体上,然后通过测定序列的方法,分析转座子在染色体上插入的位置。分析51个深蓝色菌落,其中3个菌落TTSS的分泌能力明显高于其它突变子。测序结果表明,一个突变子转座子插入mexT基因的中间,另外一个插入PA5265基因的C端,位置为1053氨基酸,该基因编码一个未知功能的蛋白,大小为1089aa,含有4个跨膜结构域,该基因是它所在操纵子的第二个基因,其下游基因为PA5264,转座子可能通过PA5264基因影响TTSS的表达与分泌,该基因同样编码一个未知功能的跨膜蛋白,大小为323aa,有4个跨膜结构域。
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