论文部分内容阅读
目的:观察中药提取成分淫羊藿苷(Icariin,ICA)对人胃癌细胞株(SGC-7901)增殖的影响。研究不同药物浓度干预后,不同时间点各组胃癌细胞周期的变化,以及各组细胞的凋亡情况,探讨淫羊藿苷对胃癌细胞的影响,评价其对胃癌患者的治疗效果。
方法:第一部分:在DMEM培养基中培养胃癌细胞株(SGC-7901),每隔1d~2d换1次培养液。培养2d后,细胞至对数期,用磷酸盐缓冲液(PBS)洗掉非贴壁细胞,换培养液传代继续培养,细胞铺满瓶底时,收集贴壁细胞。
第二部分:贴壁细胞随机分成4组。对照组:加DMEM培养基及血清;ICA干预组(共3组):加含不同浓度ICA的培养基及血清,培养12、24、36、48小时。
第三部分:将对数生长期胃癌细胞用0.25%胰酶消化,用灭菌PBS稀释离心去上清。培养基重悬细胞后计数,调整细胞浓度为106/mL,将细胞按每孔90μL种板,分别设立对照组和不同浓度淫羊藿苷(100mg/L,200mg/L,400mg/L)诱导组,每孔分别设五复孔,分别在12、24、36、48h收获。细胞用孔板离心机离心,然后去上清,0.25%胰酶消化后,每孔加90μL培养基重悬细胞,再加MTT20μL,并增设阴性对照,37。C孵育4小时,每孔加入0.04mol/LDMSO溶液100μL,用吸管反复吹打使接近结晶颗粒溶解后,用免疫酶标仪在490nm波长测光密度值(OD值),计算抑制率。
第四部分:将对数生长期细胞分为对照组、不同浓度ICA(100,200,400mg/L)诱导组,共同培养24h后,收集细胞,然后将每组细胞分两份。将收获的新鲜细胞用PBS洗涤1次,80%的冰乙醇固定过液,再用PBS洗涤1次,各组细胞加100μL浓度为10mg/L的PI溶液和50μL浓度为0.1%的RnaseA溶液,室温下避光放置30min,用流式细胞术检测各组的细胞周期和凋亡率。
结果:与对照组比较,ICA的低、中、高浓度组均对SGC-7901细胞有抑制作用,且呈一定的量效、时效关系,在中浓度24h抑制作用最为显著。在同一浓度组中,随时间延长ICA对胃癌细胞的抑制作用逐渐增强,于24h达到高峰,后逐渐减弱。SGC-7901细胞在不同浓度ICA培养液中培养12h、24h、36h、48h后测得,三种浓度在同一作用时间内均可使SGC-7901吸光度值(OD)降低,计算出各浓度组的抑制率,与对照组比较,均有显著差异(p<0.05);中浓度组抑制率最明显。
不同浓度的ICA培养液温育细胞24h后用流式细胞仪分析细胞周期。可见与对照组比较,G1期细胞比例升高,G2期细胞比例减少,S期细胞比例无明显变化。在低、中、高三个不同浓度的ICA培养液培养条件下,细胞增殖周期都受到不同程度的影响,在中浓度时细胞增殖周期变化最大。各浓度组与对照组同一细胞周期比较,均有显著差异(p<0.05)。低、中、高(即100mg/L,200mg/L,400mg/L)三个浓度的ICA培养液温育细胞24h后用流式细胞仪分析细胞凋亡。对照组凋亡率为5.46%,在低、中、高ICA三个浓度组的凋亡率分别为8.19%、21.39%、17.63%,在中浓度组时细胞凋亡率最大。
结论:在胃癌细胞的体外试验中,合适浓度的ICA对胃癌细胞SGC-7901有一定的抑制增值,促进凋亡的作用。为淫羊藿苷治疗胃癌的发展提供一定的理论依据和理论参考,并为胃癌的治疗提供新的策略。