稳定表达LBH基因前列腺癌PC-3M细胞株的建立及其对PC-3M细胞增殖和迁移的影响

来源 :广州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tjyydtj1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
前列腺癌的防治是泌尿外科领域的一个重要课题。癌基因、抑癌基因的突变、缺失、异位等引起的细胞周期失控往往可以导致肿瘤的发生。LBH(limb-bub and heart)基因是前列腺癌中的表达下调基因,免疫组化结果显示LBH基因在一些前列腺癌组织中的表达水平明显低于正常的前列腺上皮组织。为探讨LBH基因对前列腺癌的作用,本研究选取LBH低表达的前列腺癌细胞系PC-3M,拟通过慢病毒感染构建稳定表达LBH的前列腺癌细胞株,初步探讨LBH基因对前列腺癌PC-3M细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。  目的:以低表达LBH基因的人前列腺癌细胞PC-3M为模型,构建稳定表达LBH基因的前列腺癌PC-3M-LBH细胞株,初步探讨LBH基因对PC-3M细胞增殖、迁移的影响及其可能涉及的分子机制。  方法:  1.构建表达LBH基因的慢病毒载体并包装慢病毒,用慢病毒感染人前列腺癌 PC-3M细胞后,经嘌呤霉素筛选建立稳定表达 LBH基因的PC-3M-LBH细胞株;  2.采用CCK-8法和Transwell分别检测细胞的增殖和迁移能力,分析LBH基因对PC-3M细胞增殖和迁移能力的影响;  3.流式细胞术(Flow cytometry)确定LBH基因表达前后前列腺癌细胞PC-3M细胞周期的变化;  4.通过实时荧光定量PCR、Western Blot技术检测基因mRNA及蛋白表达。  结果:  1.成功构建了表达LBH基因的重组慢病毒表达载体并包装出了相应的慢病毒pLenti-LBH,通过筛选和传代培养获得了稳定表达LBH基因的PC-3M-LBH细胞株;相对对照组细胞,其LBH基因的 mRNA和蛋白表达显著上调;  2. LBH表达抑制了PC-3M细胞的增殖,在细胞接种后第5天,PC-3M-LBH细胞相对于PC-3M-NC细胞的生长抑制率为19.7%。Transwell实验中,PC-3M-LBH组迁移细胞数为(50±10),显著低于PC-3M-NC组(250±16)和PC-3M组(300±13);  3.流式细胞仪检测显示:PC-3M-NC细胞中G1期和S期百分比分别为51.77%和25.89%,而PC-3M-LBH细胞组中G1期和S期的细胞分别占细胞总数的65.83%及16.77%,表现为细胞周期G1-S期阻滞;  4. qRT-PCR结果显示:相对PC-3M-NC和PC-3M细胞,PC-3M-LBH细胞中Cyclin D1、Cyclin E2mRNA水平显著下调。  结论:LBH基因表达抑制前列腺癌细胞PC-3M的增殖和迁移;LBH可能通过下调Cyclin D1和Cyclin E2的表达来阻滞前列腺癌PC-3M细胞周期进展,最终抑制细胞增殖。
其他文献
人工湿地作为一种经济有效的污水处理方式,过去几年中得到迅速发展与推广,然而传统人工湿地主要通过原始湿地改建而来,其处理效果和应用范围受到很大限制。环境温度变化影响着湿地系统中微生物的活性,对湿地处理效果具有很大影响。针对传统湿地系统冬季低温处理性能不佳等问题,优化湿地运行条件,构建固定化生物膜复合流生态湿地工艺,开展固定化生物膜强化湿地系统运行稳定性研究,有效控制水体中有机物及氮等污染物。另外,湿
纤维素类物质是地球上最为丰富的可再生资源.将纤维素物质转化为酒精和氢等生物能源,对解决人类目前所面临的能源短缺与环境污染等问题有重要意义.纤维素物质高效利用的关键是
本文首次报道了长期农药胁迫对农田狼蛛优势类群体内过氧化物酶(POD)和酯酶(EST)等位酶的影响,并且改进了在室温低于10℃的条件下蜘蛛类的POD酶联苯胺染色的实验方法,在60℃水
米非司酮(mifepristone,MP)和左炔诺孕酮(levonorgestrel)是目前常用的两种事后紧急避孕药,在近些年的研究中,人们不断对其用药方法和用药剂量进行改进,探索有效的最佳用药方式。
李道本教授提出了一种新型的LTE组网方案,即四色原理组网。该组网方案基于四色原理,利用4阶广义互补序列区分小区,各个小区仍旧使用同样的频段,但是相邻小区之间互补码是不同
压力传感器一直是工业实践中最常用的几类传感器之一,声表面波(SAW)压力传感器作为一种新型传感器,以其体积小、成本低、稳定性高、抗电磁干扰、可无线无源工作等特点被广泛关
目的:观察硝基苯对于大白鼠的血液、心脏和肝脏的影响,探讨维生素C对于硝基苯危害的对抗作用。实验方法:以大白鼠为实验对象,测量心肌力学指标(左心室收缩压、左心室舒张末期压、左心室最大收缩速率和左心室最大舒张速率)、血液(平均动脉压、红细胞数)和组织生化(心脏的SOD、MDA,肝脏的SOD、MDA)的变化。实验结果:1.与对照组和溶剂组相比,硝基苯对于大白鼠的心肌力学指标明显呈剂量依赖性影响,左心室最
摘要:小学低、中年级段的学生由于年龄特点的影响,决定了他们注意力集中的时间较短,课堂上容易疲劳,注意力易分散,好奇、活泼、可塑性强。怎样才能提高小学语文课堂教学的有效性,收到事半功倍的效果呢?良好的教學策略、科学的教学设计能保证课堂的有效性。  关键词:语文教学;小学语文;游戏教学  游戏是儿童的天性,是小学生学习、生活中不可或缺的内容。当前,小学生游戏时间越来越少,游戏需要得不到满足,陈旧的教学
摘要:书面表达在高考中占了很大比重,而大多数学生却不知如何写作,写了的也错误百出。笔者结合自己的教学,提出了一些行之有效的复习策略和应试技巧。  关键词:书面表达;高级词汇;高级句式  在与学生交流中,笔者发现学生的思维能力很是活跃,只是他们的记忆储备库中相应的英语表达不足,要么是词汇记忆有误,要么是根本想不起相应的词汇。看到作文题目后,用汉语可以洋洋洒洒写几百字,而写英语时却不知如何下笔,即使写
SIP协议凭借其简单、灵活和易扩展等优点成为构建多媒体系统信令的主流协议。但随着用户的高速增长,基于SIP的系统暴露出“单点失效”和“性能瓶颈”等问题。P2P技术具有高容