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目的:动脉血管内皮下巨噬细胞对胆固醇酯特别是氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)摄取和流出的不平衡被认为是导致泡沫细胞形成及早期动脉粥样硬化病变的重要原因。Humanin(HN)是一种可以有效抑制神经元细胞凋亡的多肽,[Gly14]-humanin(HNG)干预高脂饮食诱导的小鼠可显著降低小鼠体内肝甘油三酯的蓄积从而对血脂代谢的调节有重要的作用。然而,HNG对脂质代谢的具体机制还有待进一步的研究,本研究旨在通过体外实验观察HNG对ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞脂质摄取及外排的变化。方法:采用体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,以ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫细胞形成为模型,用ox-LDL和[Gly14]-humanin进行药物干预。采用CCK8法检测不同浓HNG对RAW264.7细胞活力的影响。细胞脂质比色法定量检测不同浓度HNG对ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞内脂质蓄积的变化。流式细胞仪技术检测不同浓度HNG对Dil-ox-LDL在RAW264.7细胞内脂质聚积的变化,并用活细胞工作站成像技术实时观察不同浓度HNG对RAW264.7细胞摄取Dil-ox-LDL入胞动态变化情况。使用不同浓度及时间点的ox-LDL及HNG处理RAW264.7细胞,通过western blot方法检测脂质摄取相关蛋白(CD36、LOX-1)及脂质外排相关蛋白(ABCA1、ABCG1)的表达情况。结果:1.CCK8结果提示不同浓度[Gly14]-Humanin(0、100nM、1μM、10μM)处理RAW-264.7细胞12小时后不会对细胞活力产生明显影响。我们发现,细胞总胆固醇定量试剂盒检测结果示:用ox-LDL处理RAW264.7巨噬细胞,并诱导其泡沫化,不同浓度HNG能浓度依赖性减少RAW264.7细胞内ox-LDL的聚积。流式细胞仪检测结果显示,与Dil-ox-LDL单独诱导组相比,[Gly14]-Humanin与Dil-ox-LDL共培养结果示RAW264.7巨噬细胞内脂质积聚成浓度依赖性减少。同样地活细胞工作站成像动态观察了细胞内Dil-ox-LDL积聚情况,发现经过不同剂量HNG预处理后,细胞内Dil-ox-LDL红色荧光量相比Dil-ox-LDL单独诱导组呈现浓度依赖性减少。2.HNG减少RAW264.7巨噬细胞内脂质的蓄积,可能与HNG减少巨噬细胞ox-LDL的摄取及增加巨噬细胞胆固醇的排出能力有关。Western blot结果显示,在ox-LDL单独诱导下,ox-LDL能剂量(0、30、60、90、120μg/ml)依赖性增加RAW264.7细胞脂质摄取相关蛋白(CD36、LOX-1)的表达。而我们又研究HNG单独处理后,HNG能剂量(0、100nM、1μM、10μM)及时间(0、3、6、12、24 h)依赖性减少RAW264.7细胞中CD36和LOX-1的蛋白水平。最后,HNG与ox-LDL共培养后,脂质摄取相关蛋白(CD36、LOX-1)比ox-LDL单独处理组的表达量显著减少。3.同样我们采用western Blot检测脂质外排相关蛋白(ABCA1、ABCG1)的表达。结果显示,随着ox-LDL浓度的增高,ox-LDL能呈浓度依赖性的上调ABCA1和ABCG1蛋白表达,且60~120μg/ml的ox-LDL处理组增高显著,差异有统计学意义。而HNG单独处理RAW264.7细胞后,随着HNG浓度的增高,HNG能呈浓度依赖性的上调ABCA1和ABCG1蛋白表达,至少1μM的HNG处理组增高显著,差异有统计学意义。用1μM的HNG处理RAW264.7细胞不同时间(0h、3h、6h、12h、24h)后,Western Blot检测ABCA1和ABCG1的蛋白表达。结果显示,随着时间的增长,ABCA1和ABCG1的蛋白表达升高,HNG能呈时间依赖性上调ABCA1和ABCG1的蛋白表达。其中12小时升高最为显著,差异有统计学意义。最后,HNG与ox-LDL共培养后,胆固醇外排相关蛋白(ABCA1、ABCG1)比ox-LDL单独处理后的表达量显著增加。结论:HNG可抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化,通过减少细胞内脂质摄取并促进细胞内游离胆固醇流出到细胞外进而抑制细胞内脂质蓄积而发挥抗动脉粥样硬化作用,该作用可能与HNG下调RAW264.7细胞脂质摄取相关受体(CD36、LOX1)的表达,并上调脂质外排相关受体(ABCAl、ABCG1)表达有关。