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水稻是世界上最主要的粮食作物之一，全世界一半以上的人口以稻米作为主食。虫害对水稻生产造成严重危害，每年因此而造成巨大的经济损失。苏云金芽胞杆菌(Bt)是一种革兰氏阳性菌，它能够产生对鳞翅目等昆虫具有特异毒性的晶体蛋白。为了防治鳞翅目昆虫，许多Bt基因已被成功的转入到水稻中，目前已获得许多具有抗虫特性的转基因水稻品系。本文以双价Bt抗虫水稻空育131和松粳9号作为研究对象，利用PCR、real timePCR、ELISA和Southern blot等方法，从DNA水平、mRNA水平、蛋白水平进行研究，从中选育出目的基因遗传稳定、拷贝数低且Bt蛋白表达量高、室内抗虫性效果显著的转基因水稻品系。 本研究主要内容包括：⑴利用根瘤农杆菌EHA105(pbar-cry2A*)和EHA105(pbar-cry1 C*)混合菌液介导，对水稻品种松粳9号进行遗传转化，获得含有cry2A*/cry1C*/bar基因的共转化植株;以空育131(cry2A*/bar)与空育131(cry1C*/bar)为亲本，通过有性杂交获得含有cry2A*/cry1 C*/bar基因的植株。利用Basta抗感性筛选、试纸条检测、PCR、Southern blot等方法，经过T0～T7代的筛选，成功获得了60个双价Bt抗虫水稻品系(cry2A*/cry1 C*/bar)，其中以空育131为亲本的10个，松粳9号为受体的50个。⑵实时荧光定量PCR与ELISA检测结果表明不同品系相同组织中Bt基因的转录水平存在差异;相同品系的不同组织中Bt基因的转录水平也存在明显差异;此外，在转录水平上cry2A*基因的转录水平明显高于cry1C*。酶联免疫吸附测定(ELISA)结果表明Bt蛋白的表达量与Bt基因的转录水平存在正相关性;相同品系不同组织中Bt蛋白含量由高到低依次为叶片＞幼穗＞茎鞘＞糙米。⑶室内抗虫性结果显示，Bt蛋白含量较高的品系对二化螟幼虫表现出较高的致死率。Southern blot结果表明，经过连续的传代之后，外源基因的遗传趋于稳定，且外源基因的拷贝数相对较低，多数品系介于1～2个，同时单拷贝品系表现出较稳定，较高的杀虫活性，这些培育而成的新材料对于品种选育具有重要的意义。⑷利用反向PCR方法对转基因品系中表现出较好抗虫能力且单拷贝的2-1品系中的cry2A*基因的侧翼序列进行扩增，通过NCBl数据库比对确定其位于第2号染色体上。