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目的：慢性肾脏病（CKD）及其引起的终末期肾病（ESRD）是危害人类健康的主要疾病之一，其发病率高、并发症多，已经成为引起全球性关注的公共健康问题，给家庭和社会造成了巨大的经济负担。根据美国肾脏数据系统（USRDS）2019年的年报，目前CKD在全球一般人群患病率约为14.5%,其中每100名患者中就有三分之二的病人会发展为不可逆的肾功能衰竭，需要引起广泛的重视。然而目前慢性肾脏病的防治手段较为局限，口服药物和替代治疗方法的选择面都很狭窄，且费用昂贵，亟需开发新药或者新的治疗手段来降低患者治疗成本并有效缓解疾病的进展。长久以来，我国多年来的深厚中医文化底蕴沉淀出了许多对于慢性肾病有效的经方，但因其中药成分繁多，治疗机制复杂难辨，难以形成国际认可并统一的治疗准则。亟待我们深入挖掘其中的小分子成分并探索研究其具体的分子机制。本研究通过构建单侧输尿管阻塞（UUO）诱导的小鼠体内纤维化及炎症的模型和体外提取原代肾小管上皮细胞（TECs）使用TGF-β1诱导刺激纤维化以及IL-1β诱导刺激炎症模型，使用血清肾功能检测、组织切片病理染色、Western Blot、Real-time PCR、ELISA、CCK8毒性分析、免疫组织化学染色和免疫荧光标记、过表达质粒等实验方法和指标，旨在探讨中草药丹参的主要单体成分原儿茶醛（PCA）治疗梗阻性肾病的作用，以及调控lncRNA9884（LRNA9884）发挥抗炎和抗纤维化的潜在分子机制。
方法：首先建立体内SPF级C57BL/6小鼠的梗阻性肾病UUO模型,30只雄性小鼠被随机分为假手术组（Sham组）、梗阻性肾病模型组（UUO组）、低剂量原儿茶醛治疗组（10 mg/ kg/d PCA，UUO+PCA10）和高剂量原儿茶醛治疗组（40 mg/ kg/d PCA，UUO+PCA40）。PCA治疗组手术前腹腔注射给药一次，之后连续注射7天，每日一次，其余各组小鼠每日给予等体积生理盐水腹腔注射。7日之后，麻醉小鼠心脏采血并处死小鼠收集血清和处理肾脏用于开展实验。检测小鼠血清肌酐、尿素氮肾功能指标，组织切片行HE、Masson染色观察肾脏病理学改变情况；免疫组化、免疫荧光或者蛋白印迹，realtime-PCR检测α-SMA、Fibronectin、 Smad3、NF-κB、Collagen I及MCP-1、iNOS、COX-2、IL-1β、TNF-α和IL-6的表达；利用realtime-PCR检测LRNA9884表达情况; ELISA测定血清中促炎细胞因子IL-1β, TNF-α和IL-6的分泌情况。
在体外利用TECs分别建立IL-1β刺激诱导的细胞炎症模型和TGF-β1刺激诱导的细胞纤维化模型，并同时予以PCA不同浓度治疗组(20μM，40μM，80μM）一同处理24小时后，收集细胞上清和细胞，并及时提取蛋白、RNA冻存用于后续的实验。免疫荧光染色近端肾小管标志物AQP1、CK18以检测所提取TECs细胞纯度；CCK-8检测不同浓度PCA干预后的细胞活力并筛选出适宜浓度作为体外治疗的剂量；利用蛋白印迹，realtime-PCR实验方法检测各组细胞中α-SMA，Fibronectin, Collagen I, Smad3, NF-κB及MCP-1, iNOS, COX2,TNF-α和IL-6的表达；通过realtime-PCR检测各组细胞中LRNA9884的表达情况; ELISA测定细胞上清液中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的分泌情况；进一步通过体外转染pcDNA3.1-LRNA9884质粒在TECs中过表达LRNA9884，检测上述指标的变化情况。
结果：通过血清肌酐、尿素氮的检测结果以及观察组织切片HE染色情况我们发现予以PCA治疗可部分逆转UUO引起的肾功能不全和病理改变。Masson染色及纤维化代表指标α-SMA，Fibronectin, Collagen I蛋白和mRNA水平realtime-PCR检测发现予以PCA治疗可显著减轻UUO所引起的纤维沉积。通过免疫荧光、蛋白印迹，realtime-PCR以及ELISA检测发现PCA干预后在蛋白和mRNA水平上均降低了UUO所引起的炎症细胞因子的过度表达。进一步检测发现PCA降低了NF-κB和 Smad3通路的活化以及LRNA9884的表达。
根据CCK-8检测结果筛选出药物适宜治疗浓度(20μM，40μM，80μM），通过蛋白印迹，realtime-PCR检测发现PCA可以抑制IL-1β诱导的TECs中iNOS、COX2、MCP-1、TNF-α、IL-6、IL-1β促炎细胞因子在蛋白和mRNA水平上的表达。ELISA检测细胞上清发现促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达同样被PCA干预后抑制。蛋白印迹检测进一步发现磷酸化的NF-κB激活受到抑制，realtime-PCR检测发现LRNA9884的表达在PCA干预后呈剂量依赖性下降，结果提示我们 PCA的抗炎作用于调控LRNA9884有着密切关系。
进一步通过转染 pcDNA3.1-LRNA9884质粒在 TECs中过表达LRNA9884时，上述指标在蛋白和mRNA水平上的表达均显著逆转，表明PCA的确可通过介导LRNA9884/ MCP-1信号通路来抑制炎症反应。进一步使用PCA干预TGF-β1刺激的TECs，我们发现PCA能抑制TGF-β1诱导的纤维化模型中磷酸化的Smad3的活化，在蛋白和mRNA水平上均减轻纤维相关指标α-SMA，Fibronectin, Collagen I的表达，从而阻止上皮-间质转化（EMT）。
结论：1．原儿茶醛可改善UUO小鼠肾功能损害，减轻肾小管的坏死。2．原儿茶醛在体内外均可抑制小鼠肾脏上皮-间质转化的发生和促炎因子的浸润。3．原儿茶醛可通过下调LRNA9884/MCP-1信号途径减轻炎症以改善肾间质纤维化。
总之，原儿茶醛可通过抑制LRNA9884和NFκB信号途径引起的炎症反应以减轻阻塞性肾病的纤维化，研究结果为PCA在未来应用于临床治疗奠定了新的理论基础。
方法：首先建立体内SPF级C57BL/6小鼠的梗阻性肾病UUO模型,30只雄性小鼠被随机分为假手术组（Sham组）、梗阻性肾病模型组（UUO组）、低剂量原儿茶醛治疗组（10 mg/ kg/d PCA，UUO+PCA10）和高剂量原儿茶醛治疗组（40 mg/ kg/d PCA，UUO+PCA40）。PCA治疗组手术前腹腔注射给药一次，之后连续注射7天，每日一次，其余各组小鼠每日给予等体积生理盐水腹腔注射。7日之后，麻醉小鼠心脏采血并处死小鼠收集血清和处理肾脏用于开展实验。检测小鼠血清肌酐、尿素氮肾功能指标，组织切片行HE、Masson染色观察肾脏病理学改变情况；免疫组化、免疫荧光或者蛋白印迹，realtime-PCR检测α-SMA、Fibronectin、 Smad3、NF-κB、Collagen I及MCP-1、iNOS、COX-2、IL-1β、TNF-α和IL-6的表达；利用realtime-PCR检测LRNA9884表达情况; ELISA测定血清中促炎细胞因子IL-1β, TNF-α和IL-6的分泌情况。
在体外利用TECs分别建立IL-1β刺激诱导的细胞炎症模型和TGF-β1刺激诱导的细胞纤维化模型，并同时予以PCA不同浓度治疗组(20μM，40μM，80μM）一同处理24小时后，收集细胞上清和细胞，并及时提取蛋白、RNA冻存用于后续的实验。免疫荧光染色近端肾小管标志物AQP1、CK18以检测所提取TECs细胞纯度；CCK-8检测不同浓度PCA干预后的细胞活力并筛选出适宜浓度作为体外治疗的剂量；利用蛋白印迹，realtime-PCR实验方法检测各组细胞中α-SMA，Fibronectin, Collagen I, Smad3, NF-κB及MCP-1, iNOS, COX2,TNF-α和IL-6的表达；通过realtime-PCR检测各组细胞中LRNA9884的表达情况; ELISA测定细胞上清液中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的分泌情况；进一步通过体外转染pcDNA3.1-LRNA9884质粒在TECs中过表达LRNA9884，检测上述指标的变化情况。
结果：通过血清肌酐、尿素氮的检测结果以及观察组织切片HE染色情况我们发现予以PCA治疗可部分逆转UUO引起的肾功能不全和病理改变。Masson染色及纤维化代表指标α-SMA，Fibronectin, Collagen I蛋白和mRNA水平realtime-PCR检测发现予以PCA治疗可显著减轻UUO所引起的纤维沉积。通过免疫荧光、蛋白印迹，realtime-PCR以及ELISA检测发现PCA干预后在蛋白和mRNA水平上均降低了UUO所引起的炎症细胞因子的过度表达。进一步检测发现PCA降低了NF-κB和 Smad3通路的活化以及LRNA9884的表达。
根据CCK-8检测结果筛选出药物适宜治疗浓度(20μM，40μM，80μM），通过蛋白印迹，realtime-PCR检测发现PCA可以抑制IL-1β诱导的TECs中iNOS、COX2、MCP-1、TNF-α、IL-6、IL-1β促炎细胞因子在蛋白和mRNA水平上的表达。ELISA检测细胞上清发现促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达同样被PCA干预后抑制。蛋白印迹检测进一步发现磷酸化的NF-κB激活受到抑制，realtime-PCR检测发现LRNA9884的表达在PCA干预后呈剂量依赖性下降，结果提示我们 PCA的抗炎作用于调控LRNA9884有着密切关系。
进一步通过转染 pcDNA3.1-LRNA9884质粒在 TECs中过表达LRNA9884时，上述指标在蛋白和mRNA水平上的表达均显著逆转，表明PCA的确可通过介导LRNA9884/ MCP-1信号通路来抑制炎症反应。进一步使用PCA干预TGF-β1刺激的TECs，我们发现PCA能抑制TGF-β1诱导的纤维化模型中磷酸化的Smad3的活化，在蛋白和mRNA水平上均减轻纤维相关指标α-SMA，Fibronectin, Collagen I的表达，从而阻止上皮-间质转化（EMT）。
结论：1．原儿茶醛可改善UUO小鼠肾功能损害，减轻肾小管的坏死。2．原儿茶醛在体内外均可抑制小鼠肾脏上皮-间质转化的发生和促炎因子的浸润。3．原儿茶醛可通过下调LRNA9884/MCP-1信号途径减轻炎症以改善肾间质纤维化。
总之，原儿茶醛可通过抑制LRNA9884和NFκB信号途径引起的炎症反应以减轻阻塞性肾病的纤维化，研究结果为PCA在未来应用于临床治疗奠定了新的理论基础。