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目的:⑴通过体内外实验明确WIP1在病毒感染中抗病毒作用;⑵通过体内外实验明确WIP1在病毒感染中对炎症的调节作用。 方法:①用VSV病毒刺激野生型和WIP1敲除小鼠的腹腔巨噬细胞。通过Western Blot法检测NF-κB以及MAPK通路的活化情况。同时采用Real-time PCR以及ELISA法分析IL-1β、IL-6和TNFα等炎症因子的表达情况,探究WIP1在VSV病毒感染引起的炎症中的作用。②用VSV病毒刺激野生型和WIP1敲除小鼠的腹腔巨噬细胞,通过Real-time PCR和Western Blot法检测RIG-I及其下游的TRAF3、TBK1、MAVs、IRF3、IRF7、ISG15和ISG56的表达水平和活化情况,通过ELISA法检测IFNβ的表达情况。同时,检测病毒的滴度和扩增水平。明确WIP1是否通过调节RIG-I通路产生IFNβ从而控制病毒的复制增殖。③用VSV感染野生型小鼠,建立肺炎模型。取肺灌洗液,用ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNFα和IFNβ的表达水平。取肺组织研磨,用Real-time PCR和Western Blot法检测 RIG-I和其下游的TRAF3、NFκB、TBK1、MAVs、IRF3、IRF7、ISG15和ISG56的表达水平和活化情况。同时取肺灌洗液检测病毒滴度,分析WIP1敲除对小鼠病毒清除能力的影响。用高滴度VSV感染野生型和WIP1敲除小鼠,计算小鼠死亡率,分析WIP1的抗病毒功能。④取野生型和WIP1敲除小鼠的腹腔巨噬细胞,经VSV病毒刺激后,收取细胞培养上清,通过 ELISA法检测 IL-1β,caspase1的表达情况。并且,提取上清蛋白后用Western Blot法检测上清中成熟的IL-1β,caspase1的表达情况。⑤用VSV病毒刺激野生型和WIP敲除小鼠的腹腔巨噬细胞,分析炎症小体的活性。通过Real-time PCR和Western Blot法检测在细胞中NLRP3,IL-18,caspase1的表达水平和活化情况。 结果:⑴WIP1敲除后,RIG-I通路、NF-κB通路表达水平降低,小鼠(或小鼠腹腔巨噬细胞)对病毒易感性增加,下游 IFNβ表达减弱,病毒扩增更多,滴度升高;⑵WIP1敲除后,小鼠(小鼠腹腔巨噬细胞)中炎症因子 IL-1β、IL-6和TNFα表达降低,炎症反应减弱;⑶在VSV病毒感染中,野生型小鼠炎症小体剪切活性增加,NLRP3表达升高,同时上清中成熟的IL-1β,caspase1,以及IL-18表达升高。 结论:①WIP1提高小鼠抗病毒能力加强炎症反应;②WIP1增强RIG-I介导的I型干扰素IFN-β的产生;③WIP1促进VSV诱导的NLRP3炎症小体活性。