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1.背景和目的: 经典抗精神病类药物氟哌啶醇(Haloperidol, Hal)为丁酰苯类化合物,适用于治疗以兴奋躁动、紧张焦虑、幻觉妄想为主的精神分裂症和狂躁症。选择性地拮抗多巴胺D2受体,是其作为抗精神病药物的基础。它的局限性主要表现在临床应用导致患者锥体外系症状(Extrapyramidal syndrome,EPS)。 电压门控钠通道(Voltage-gated sodium channels, VGSCs)是形成动作电位的上升支的基础,控制着神经元的兴奋性和动作电位的形成,对于可兴奋细胞的电学特性至关重要。 以前的研究认为氟哌啶醇主要通过拮抗多巴胺受体调控神经元的兴奋性、突触可塑性等功能,而对多巴胺受体的下游离子通道的影响还有待研究。本实验运用全细胞膜片钳技术研究不同剂量及不同作用时间下氟哌啶醇对小鼠皮层神经元电压门控钠离子通道和动作电位的影响,并分析多巴胺D2受体样激动剂溴隐亭(Bromocriptine, BCT)和脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor, BDNF)对氟哌啶醇的干预作用。 2.方法: 2.1无血清培养小鼠原代皮层神经元,免疫荧光鉴定神经元纯度; 2.2不同剂量(10,25,250μmol/L持续5min) Haloperidol处理神经元,电压钳检测Na+电流的变化以及冲洗后的变化; 2.3 Haloperidol(25μmol/L持续5min)处理神经元,拟合VGSCs激活、失活和恢复曲线; 2.4电流钳检测Haloperidol(25μmol/L持续5min)处理神经元细胞,观察动作电位的变化; 2.5不同剂量(0.1,1,10,25,100μmol/L)Haloperidol分别持续孵育神经元24h;25μmol/L和100μmol/L Haloperidol分别孵育神经元不同时长(30min,1,2,4,8,24,48 h)后检测神经元Na+电流的变化; 2.6 Haloperidol(25μmol/L持续24h)处理神经元,检测VGSCs激活、失活特性以及恢复特性的变化; 2.7 Haloperidol(25μmol/L持续24h)处理神经元,检测动作电位的变化; 2.8 Bromocriptine和BDNF分别先于Haloperidol1h处理神经元,记录Na+电流及激活,失活特性的变化。 3.结果: 3.1通过间接免疫荧光鉴定,小鼠原代皮层神经元纯度在95%以上,胞体饱满周围晕光明显,突起交织成稀疏的网络; 3.2 Halperidol急性作用下对Na+电流幅度呈剂量依赖性抑制,IC50=19.38μmol/L; 3.3与对照组相比,Halperidol急性作用下,改变了失活曲线的V1/2,使其由-46.62mV超级化至-59.10mV; 3.4与对照组相比,Haloperidol(25μmol/L)急性作用下完全阻断动作电位的生成。 3.5与对照组相比,慢性作用下,Haloperidol呈剂量依赖性和时间依赖性增强钠电流幅度, IE50=10.64μmol/L; 3.6与对照组相比,慢性作用下Haloperidol使VGSCs的激活曲线左移,V1/2由-31.19mV超级化至-41.04mV,失活曲线无显著变化; 3.7与对照组相比,慢性作用下Haloperidol降低动作电位的阈值,增强神经元的放电频率。 3.8 Bromocriptine和BDNF均可阻断Haloperidol慢性作用下的钠电流增强作用,有效逆转VGSC的失活加速,并且BDNF可能逆转VGSC的加速激活。 4.结论: 急性作用下氟哌啶醇以剂量依赖方式可逆性地抑制小鼠皮层神经元VGSC的活性,诱导神经元兴奋性下降;慢性作用下氟哌啶醇剂量依赖性、时间依赖性地增强钠电流幅度,加速钠通道开放,导致神经元兴奋性增强,并且这种增强作用可被Bromocriptine和BDNF抵消。Haloperidol这种于皮层神经元的时间依赖型效应可能解释了氟哌啶醇在临床治疗和副作用方面的时间依赖性效应。同时本研究揭示了BDNF用于治疗EPS的潜在可能。