论文部分内容阅读
背景及目的绒癌是发生于育龄妇女的高度恶性肿瘤,化疗是其主要的治疗方式；然而化疗耐药已成为绒癌治疗失败的主要原因之一,因此,探讨绒癌的耐药机制对于制定针对性的治疗方案,改善耐药患者的预后具有重要的临床意义。C1QBP,即补体成分1Q亚补体结合蛋白,为本课题研究的重点之一。本课题组前期从细胞学、动物实验中均证实其可能与恶性滋养细胞肿瘤耐药相关,表现为(1)绒癌耐药细胞株中C1QBP水平较亲本株均明显上调(2)使C1QBP沉默表达后,结果其IC50和RI明显降低,出现耐药性逆转；C1QBP基因敲除组裸鼠皮下移植瘤,成瘤时间长,肿瘤体积及重量明显受抑制,同剂量化疗药物(VP16)对肿瘤抑制率较对照组明显升高。以上结论均提示C1QBP很可能与绒癌耐药相关。本次实验第一部分拟测定不同人群血清中C1QBP的水平并研究其与GTN耐药的关系。hCG的一个相关分子——高糖基化hCG已成为近几年滋养细胞肿瘤领域的研究热点。国外早有文献表明高糖基化hCG可以取代3-hCG成为滋养细胞肿瘤的特异性标志物,但国内关于此类的研究几乎为空白。本实验第二部分拟测定人血清中高糖基化hCG的水平、所占总hCG比例并探讨其与GTN耐药的关系。研究方法1.研究对象：连续入选于2011年6月至2012年4月期间在北京协和医院体检及就诊的健康妇女、正常妊娠妇女和滋养细胞疾病患者。2.标本及临床资料收集：全部GTN患者及正常妊娠妇女标本来自北京协和医院进行血清β-hCG检测的剩余血清,健康妇女来自检验科生化检查后剩余的血清。48h之内将血清样本分装到0.6mL EP管中,转移至-80℃冰箱冻存。同时详细记录同一样本的血清β-hCG水平以及所有对象相应的临床资料。3.检测上述样本外周血清C1QBP、H-hCG的浓度。二者均采用ELISA试剂盒检测。4.采用回顾性分析的方法,分析C1QBP、H-hCG在不同人群血清中的表达水平,并分析他们各生物学变量及化疗耐药的相关性。5.采用SPSS13.0软件进行统计学分析。样本的正态性分布利用Shapiro-Wilk检验；两组正态分布独立样本比较采用t检验；两组非正态分布独立样本利用Mann-Whitney非参数检验；多组非正态分布独立样本比较利用ANOVA非参数检验,组间两两比较用LSD-t法检验,P<0.05(双侧)有统计学差异。实验结果1.(1) C1QBP在健康妇女和GTN患者血清中均可测得,其中健康妇女为25.16±10.93μg/L, GTN患者为29.35±9.97μg/L,健康妇女与GTN患者间无显著性差异(P=0.051)(2)在耐药血清中C1QBP的水平(38.54±9.17pg/L)高于敏感血清(26.72±8.47pg/L)、治愈血清(25.53±6.49μg/L)和健康妇女(25.16±10.93μg/L)(P=0.000,0.000,0.000),敏感与治愈、治愈与健康妇女、健康妇女与敏感血清中无差异(P=0.474,0.876,0.437)(3)患者耐药前血清中C1QBP的水平高于敏感前血清,有显著性差异(P=0.001)(4)不同耐药方案、不同部位的耐药病灶之间C1QBP的水平无明显差异(P=0.189,0.294)(5)分别对比是否化疗、化疗前后、停药10天以内/以上的血清C1QBP水平,无显著性差异(P=0.442,0.421,0.159)(6)在敏感血清中,从未耐药和曾经耐药的血清之间无明显差异(P=0.967)。2.(1)在正常妊娠妇女中,H-hCG占总hCG的比例在孕期8周以内(22.09±20.57%)与8周以上(11.86±13.55%)无显著性差异(P=0.317)。(2)不同人群中H-hCG占总hCG的比例,敏感血清(74.6±±32.9%)远高于绒癌耐药血清(12.8±11.1%)和正常妊娠妇女(22.09±±20.57%)(P=0.000,0.000),而耐药血清与正常妊娠妇女之间无显著差异(P=0.594)。结论1.(1) C1QBP在健康妇女、GTN患者中无显著差异。(2)GTN耐药血清中C1QBP的水平远高于敏感血清和治愈血清,提示C1QBP可能与GTN耐药有一定关系。(3) C1QBP有可能参与或导致了绒癌的化疗耐药,为今后逆转耐药的治疗提供了新的思路。而与不同的化疗方案和不同部位耐药病灶之间无明显相关性。(4)人血清中的C1QBP不随化疗的刺激和停止而变化。亦不会持续高水平存在于耐药患者体内。证实其作为绒癌耐药标记物比较可靠。2. H-hCG占总hCG的比例在耐药患者中远低于敏感患者,可作为判断患者是否耐药的另一项血清学指标。