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乳腺癌是女性最为常见的恶性肿瘤之一。在乳腺癌的发生发展过程中,内源性雌激素起着主要作用,约50%的原发性乳腺癌与雌激素相关。传统的内分泌治疗主要针对ERα,然而大量临床研究表明:ERα阳性的乳腺癌患者,只有约60%的患者对他莫昔芬激素治疗有效,40%的患者对于内分泌治疗不敏感,而ERα阴性的乳腺癌中有10%的患者对于内分泌治疗有效。ERβ自1996年Mosselman等人发现以来,因为其在乳腺癌中的潜在作用以及对于预测内分泌治疗反应性的价值成为了研究热点。ERβ与ERα在分子结构和受体分布上的不同提示二者在功能上存在着差异。然而对于ERβ的表达在肿瘤中的生物学作用以及ERβ表达提示乳腺癌激素治疗敏感还是耐药,现阶段的研究结果还存在着巨大的差异。有研究表明ERβ的生物学功能受ERα表达状态的影响,所以,我们想通过本次试验研究在ERα阴性和ERα阳性的不同条件下ERβ的功能。目的:通过将包含ERβ基因的质粒pReveicer-M72-ERβ对MCF-7细胞和MDA-MB-231进行转染,研究在ERα阳性和ERα阴性的不同条件下,外源性ERβ的表达对乳腺癌细胞生长的影响,以及ERβ的表达是否改变细胞对雌二醇、他莫昔芬的反应;探讨ERβ的功能及ERβ与ERα之间的相互关系及可能的相互作用,以及ERβ能否作为一种预测因子,与ERα一起共同预测肿瘤对于内分泌治疗的反应性。方法:(1)提取包含ERβ基因的质粒pReveicer-M72-ERβ并通过琼脂糖凝胶电泳实验验证。(2)利用脂质体转染试剂Lipofectmine LTX将质粒pReveicer-M72-ERβ对MCF-7细胞和MDA-MB-231进行转染,两种细胞均设置空载体组和空白对照组。(3)细胞转染后20小时,通过荧光显微镜、免疫荧光及Western Blot等方法验证ERβ基因在细胞中的表达。(4)将细胞分为MCF-7组、MCF-7ERβ组、MCF-7空组、MDA-MB-231组、MDA-MB-231ERβ组、MDA-MB-231空组,对各组细胞进行雌二醇、他莫昔芬处理,并同时设置未处理组作为对照。用MTT法绘制各组细胞在不同处理因子作用下的生长曲线。结果:(1)琼脂糖凝胶电泳实验显示提取的质粒pReveicer-M72-ERβ与预期大小相一致。(2)Western Blot证实MCF-7ERβ组和MDA-MB-231ERβ组的ERβ表达量与各自对照组相比显著增高。(3)与MDA-MB-231组和MDA-MB-231空组相比,MDA-MB-231ERβ组细胞生长速度加快,三组细胞对于雌二醇、他莫昔芬的反应无差异性。(4)与MCF-7组和MCF-7空组对比,MCF-7ERβ组细胞生长速度减慢;在雌二醇的作用下,MCF-7ERβ组细胞的生长速度比其他两组细胞减慢,三组细胞对于他莫昔芬的反应无差异性。结论:(1)在ERα表达的条件下,ERβ的表达能够抑制细胞的生长,并且能够使细胞对于雌激素的敏感性下降,但不会增加对他莫昔芬的耐药性。(2)在无ERα表达的条件下,ERβ的表达能够促进细胞的生长,但是不改变细胞对雌二醇、他莫昔芬的反应性。