论文部分内容阅读
目的探讨体外培养的人早孕绒毛滋养层细胞,在含有抗子宫内膜抗体(EmAb)血清环境中,低分子肝素(LMWH)对其细胞增殖能力和凋亡情况的调节作用。方法抽取在我院门诊就诊的EmAb阳性而其它与自然流产相关的免疫性抗体均阴性的病人肘静脉血5m1,各相关免疫性抗体均阴性的正常育龄妇女肘静脉血5m1,离心后取上清,-80℃保存备用。无菌条件下获取正常妊娠6-8周绒毛组织,经胰蛋白酶/DNA酶I联合消化后,Percoll密度梯度离心法行纯化培养,将最终获得的滋养层细胞应用免疫细胞化学法对其进行纯度鉴定,并同时传代培养。将传1-2代的滋养层细胞随机分为4组：A1组(研究1组)：加入EmAb(+)血清不加LMWH,A2组(研究2组)：加入EmAb(+)血清及LMWH,B1组(对照1组)：加入EmAb (-)血清不加LMWH, B2组(对照2组)：加入EmAb(-)血清及LMWH.按上述分组培养24小时后,采用MTT法检测490nm OD值；细胞免疫荧光法检测增殖细胞核抗原(PCNA);流式细胞术检测细胞凋亡率。结果1.MTT法检测490nm OD值A1组OD值为0.1007±0.0125,B1组为0.2117±0.0106,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)；A2组为0.1982±0.0135,与A1组比较差异有统计学意义(P<0.05)；B2组为0.2211±0.0080,与B1组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.细胞免疫荧光法检测PCNA平均荧光灰度值(%)A1组、B1组平均荧光灰度值分别为(9.77±0.61)%和(21.40±1.93)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)；A2组为(20.96±1.31)%,与A1组比较差异有统计学意义(P<0.05)；B2组为(22.42±1.70)%,与B1组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.流式细胞术检测细胞凋亡率(%)A1组、B1组细胞凋亡率分别为(2.64±0.10)%和(0.79±0.03)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)；A2组为(0.82±0.02)%,与A1组比较差异有统计学意义(P<0.05)；B2组为(0.76±0.03)%,与B1组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验证明,EmAb可通过抑制绒毛滋养层细胞的增殖、促进细胞的凋亡,影响此细胞的发育能力,进而对滋养层细胞的生物学行为产生影响,而LMWH能调节EmAb对滋养层细胞的这种影响,推测这是EmAb阳性流产患者发生流产的原因之一；也是LMWH提高此类患者妊娠成功率的机理之一。