曙红Y化学发光新体系在药物分析测定中的应用研究

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本文在建立曙红Y化学发光新体系的基础上,围绕药物成分含量分析以及药物抗氧化活性测评这两方面进行研究。主要工作如下:   1)建立了曙红Y-Fe2+-H2O2化学发光新体系,并用于葛根素含量及其对羟自由基清除率的测定。实验发现,Fe2+-H2O2在线生成的羟自由基与曙红Y在无增敏剂的情况下能产生较强的化学发光,葛根素能清除体系中部分羟自由基,使化学发光强度降低,降低程度与溶液中葛根素浓度呈良好的化学计量关系。据此,结合流动注射技术,建立了化学发光测定葛根素的新方法。考察了影响化学发光强度的因素并探讨了可能的反应机理。在最佳条件下方法的线性范围为8.0×10-8~2.0×10-6mol·L-1,检出限为7.5×10-9mo1·L-1。对4.0×10-7mol·L-1的葛根素进行11次平行测定,其相对标准偏差为1.7%。此法已用于葛根素注射液含量的测定,结果与药典方法测定值一致。依据葛根素对羟自由基的清除作用以二甲亚砜和甘露醇作为参照物对其抗氧化活性进行测定,结果表明,葛根素在三种物质中清除羟自由基的能力最强。   2)基于酸性条件下黄豆苷元对曙红Y-Fe2+-H2O2体系的发光强度有明显的抑制作用,建立了化学发光抑制法对药物制剂中黄豆苷元测定的新方法。详细考察了影响化学发光强度的因素并初步探讨了发光反应机理以及黄豆苷元对发光强度的抑制机理。在最佳条件下方法的线性范围为8.0×10-8~3.0×10-6mo1·L-1,检出限为9.0×10-9mol·L-1。对1.0×10-6mol·L-1的黄豆苷元进行11次平行测定,其相对标准偏差为1.7%。此法用于黄豆苷元片剂含量测定,结果令人满意。采用二甲亚砜和甘露醇作为参照物对其羟自由基清除率进行测定,结果表明,三种物质抗氧化活性大小顺序为黄豆苷元>二甲亚砜>甘露醇。   3)实验发现不同浓度抗癌药物阿糖胞苷对新体系的发光强度出现抑制和增敏两种现象。在酸性条件下,低浓度阿糖胞苷对体系的发光强度有抑制作用,因此以曙红Y-Fe2+-H2O2体系为基础结合流动注射技术建立了阿糖胞苷注射液痕量分析的新方法。考察了影响发光强度的因素,初步探讨了化学发光反应机理。在最佳条件下,方法的线性范围为6.0×10-9~1.0×10-7mol·L-1,检出限为7.6×10-10mo1·L-1。对6.0×10-8mol·L-1的阿糖胞苷进行11次平行测定,其相对标准偏差为1.8%。此法用于注射液中阿糖胞苷的测定,所得结果与药典方法结果无显著差异。   4)研究发现,在酸性条件下,甘草酸二铵对曙红Y-Fe2+-H2O2体系的发光信号有明显的抑制作用,据此,结合流动注射技术建立了化学发光测定甘草酸二铵的新方法。在最佳条件下,方法的线性范围为6.0×10-8~2.0×10-6mol·L-1,检出限为8.0×10-9mol·L-1。对1.0×10-6mol·L-1的甘草酸二铵进行11次平行测定,其相对标准偏差为1.6%。此法用于胶囊及注射液中甘草酸二铵含量的测定,结果与药典方法测定结果无显著差异。依据甘草酸二铵对发光强度的抑制作用,对甘草酸二铵、DMSO和甘露醇三种物质的羟自由基清除率进行测定,以非线性拟合方法计算得到的IC50进行抗氧化活性的比较。实验结果表明,IC50的大小顺序为甘露醇>二甲亚砜>甘草酸二铵。
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