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肿瘤患者的外周血中存在癌细胞是引发肿瘤复发转移、导致患者死亡的重要原因。有效清除血循环中的微量癌细胞对预防肿瘤复发、改善肿瘤晚期患者的生存质量具有重要意义。而体内回输免疫活性细胞的过继免疫疗法可以在不损伤机体免疫系统结构和功能的前提下，直接杀伤肿瘤细胞，已成为肿瘤手术、放疗、化疗的重要辅助治疗方法。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer，CIK)是由IFN-r、CD3单抗及IL-2等细胞因子在体外刺激外周血单个核细胞而诱生出的具有非特异性细胞毒作用的效应细胞。在现今发现的所有免疫效应细胞中，具有较强的增殖能力、较强的细胞毒活性和非MHC限制性。而树突状细胞(dendritic cell，DC)是目前发现的功能最强的抗原递呈细胞，可有效激发免疫应答。因此将CIK细胞和DC细胞联合应用治疗恶性肿瘤，无疑会起到协同作用。本实验通过抗原致敏DC联合CIK对肺癌细胞株A549和肺腺癌原代细胞的杀伤作用研究提供理论及试验依据。目的研究肿瘤抗原致敏的树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对肺癌细胞株A549和肺腺癌原代细胞的杀伤作用，并与DC联合淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine-activated killer，LAK)、CIK、LAK的杀伤效果进行比较。为临床DC联合CIK治疗肺癌提供理论和试验依据。方法在无菌条件下取健康献血者外周新鲜血，采用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞(PBMNC)，常规诱导出DC、CIK、LAK细胞；用肺癌A549细胞提取的肿瘤抗原冲击DC，倒置显微镜下观察DC形态，流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经肿瘤抗原冲击后其表型变化；把CIK细胞、DC-CIK细胞、LAK细胞和DC-LAK细胞作为效应细胞，肺癌细胞株A549和肺腺癌原代细胞作为靶细胞，共分为8组，在10：1、20：1、50：1的效靶比时，进行杀伤试验；使用LDH释放法测定杀伤活性；ELISA法检测杀伤试验中细胞因子IL-2、IL-4、IL-12、IFN-r的分泌水平。结果一、细胞形态与增殖观察：从外周血分离出单个核细胞，贴壁培养2小时，贴壁的细胞用于诱导生成DC，培养8天倒置显微镜下可见部分细胞变大、不规则，伸出伪足，而用肺癌肿瘤抗原冲击后24h大部分细胞出现毛刺状突起呈典型树突状细胞。悬浮的细胞分别用于诱导生成CIK和LAK细胞，3天后CIK细胞生长迅速，出现大量的生长集落，体积明显变大呈多形性。而LAK细胞形态单一，无明显集落形成。CIK细胞的增殖能力明显高于同条件下培养的LAK细胞。二、DC表型分析：流式细胞仪检测DC经肿瘤抗原冲击和未经肿瘤抗原冲击其表面分子表达情况，未经肿瘤抗原冲击的DC其表面分子CD40、CD80、CD86、HLA-DR表达分别为：4.25％、12.12％、5.16％、38.02％；经肿瘤抗原冲击后的DC其表面分子CD40、CD80、CD86和HLA-DR表达分别为74.31％、85.81％、53.29％、90.71％，差异显著(P＜0.01)，这说明经肿瘤抗原冲击后DC细胞明显成熟。三、细胞杀伤试验：在10：1、20：1、50：1三种效靶比时，用LDH释放法测定DC-CIK细胞、DC-LAK细胞和CIK、LAK细胞对肺癌细胞株A549和肺腺癌原代细胞的杀伤活性。结果显示：1、在同一效靶比时，DC-CIK细胞组对靶细胞的杀伤作用最强，明显高于CIK、DC-LAK、LAK细胞组(P＜0.05)。2、在效靶比例为10：1～50：1的范围内，DC-CIK细胞组杀伤活性随着效靶比提高而明显升高，以效靶比为50：1时，杀伤活性最强(P＜0.05)。3、在同一效靶比时，DC-CIK细胞组对肺癌细胞株A549和肺腺癌原代细胞的杀伤作用无明显差异(P＞0.05)。四、细胞杀伤试验中细胞因子分泌水平：在效靶比为50：1时，检测8组细胞杀伤试验中细胞因子IL-2、IL-4、IL-12、IFN-r量的变化。在同一靶细胞条件下，DC-CIK细胞组中IFN-r、IL-12的含量明显高于其它3组(P＜0.05)；而IL-2的含量以DC-LAK细胞组为最高，DC-LAK和LAK细胞组明显高于其他2组(P＜0.05)；在8组细胞杀伤试验中，都没有检测到IL-4。结论肺癌抗原致敏的DC联合CIK细胞能显著提高对肺癌细胞的杀伤作用。DC-CIK细胞对肺癌的杀伤作用明显高于CIK、DC-LAK、LAK细胞。这可能由于肿瘤抗原致敏的DC通过分泌一些细胞因子和共刺激分子来诱导特异性CIK细胞及促进CIK细胞增殖，通过这两方面来显著提高CIK细胞的杀瘤效应。DC-CIK细胞可作为一种新的广谱、高效的免疫效应细胞应用于临床肿瘤的治疗，特别是用于肿瘤病人手术后预防复发和转移。