论文部分内容阅读
2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)是一种以慢性血糖增高为特征的代谢性疾病,病因复杂且尚未明确。临床上T2DM患者往往易出现感染性并发症,尤其在血糖控制不佳的情况下,感染病灶易扩散,且病情相对难以控制,提示T2DM患者的免疫系统可能存在一定程度的功能紊乱。目前二甲双胍(metformin)是治疗T2DM的一线药物,近来较多文献报道二甲双胍具有免疫调节作用。本课题于2016年8月至2017年5月间收集我院内分泌科住院的T2DM患者68例外周血样本,其中未曾二甲双胍治疗者38例(T2DM组),入院前已接受二甲双胍治疗者30例(二甲双胍治疗组),同时收集健康体检者(HC)47例外周血。运用流式细胞技术检测三组研究对象CD4~+和CD8~+T细胞所占比例,测定佛波酯/离子霉素(PMA/Iono)刺激下外周血分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的CD4~+和CD8~+T细胞百分比,以及流感病毒、EB病毒和巨细胞病毒抗原肽刺激下分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的抗原特异性CD8~+T淋巴细胞百分比。并运用Seahorse XFe细胞能量代谢分析技术,检测了2型糖尿病患者外周血在EB病毒抗原肽刺激下,CD8~+T细胞免疫效应阶段的代谢变化。此外观察了二甲双胍环境对PMA/Iono刺激下分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的CD4~+和CD8~+T细胞百分比的影响,以及对流感病毒、EB病毒和巨细胞病毒抗原肽刺激下分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的抗原特异性CD8~+T淋巴细胞百分比所带来的变化。结果显示:与HC相比,T2DM组患者CD4~+T淋巴细胞百分比明显升高,而二甲双胍治疗组与HC组的差异没有统计学意义,T2DM组与二甲双胍组结果的差异亦无统计学意义。与HC组相比,T2DM组患者CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比值明显升高,而值得一提的是,二甲双胍治疗组与HC组的差异没有统计学意义,并且二甲双胍治疗组CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比值与T2DM组的相比显著降低。经非特异性PMA/iono刺激后,和HC组相比,T2DM组和二甲双胍组患者外周CD4~+T细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α的细胞比例均显著降低,值得一提的是,二甲双胍治疗组患者外周血分泌IFN-γ和TNF-α的CD4~+T细胞比例较T2DM组显著升高,而CD4~+T淋巴细胞分泌IL-2的比例在两者之间的差异不显著;T2DM组和二甲双胍组患者外周CD8~+T细胞分泌三种细胞因子的比例与HC组相比,均显著降低,而三种细胞因子在T2DM组和二甲双胍组两者之间的差异均不显著。特异性抗原肽刺激结果如下:经FLU抗原肽刺激后,T2DM组和二甲双组患者外周CD8~+T细胞分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的细胞百分比均显著高于HC组,而三种细胞因子的分泌情况在T2DM组和二甲双胍组两者之间的差异均不显著。经EBV抗原肽刺激后,与HC组相比,T2DM组和二甲双胍组患者外周CD8~+T细胞分泌三种细胞因子的比例均显著升高,而二甲双胍治疗组患者外周血分泌IL-2和TNF-α的CD8~+T细胞比例较T2DM组显著降低,但CD8~+T淋巴细胞分泌IFN-γ的比例在两者之间的差异不显著。经CMV抗原肽刺激后,T2DM组和二甲双胍组患者外周分泌IL-2和TNF-α的细胞百分比均显著高于HC组,并且T2DM组分泌IFN-γ的CD8~+T细胞亦显著高于HC组,然而值得注意的是,二甲双胍治疗组患者CD8~+T细胞分泌IFN-γ的比例与HC相比差异不明显。并且,EBV抗原特异性CD8~+T细胞分泌IFN-γ的细胞百分比与非糖酵解(non glycolysis acidification)胞外酸化率(ECAR)成正比,而分泌的IL-2的细胞百分比与细胞基础呼吸(basal respiration)线粒体耗氧率(OCR)和ATP生产(ATP production)相关OCR值呈正相关。另外,在短暂的二甲双胍环境中,经PMA/iono刺激后,T2DM患者外周血CD4~+分泌IFN-γ细胞百分比显著降低。以上结果说明,T2DM患者CD4~+和CD8~+T细胞分泌细胞因子能力降低,但抗原特异性免疫应答则处于异常激活状态,提示慢性高血糖可损伤部分T细胞功能,加重慢性炎症,并且T细胞的能量代谢与其免疫功能关系密切。同时,二甲双胍可以有效改善T2DM患者高血糖状态下外周血CD4~+和CD8~+T细胞分泌能力的降低,并且一定程度上抑制抗原特异性T细胞的异常激活。说明二甲双胍对于T2DM患者感染性并发症的防治能起到一定作用,同时也能一定程度上改善机体的慢性炎症状态。