论文部分内容阅读
黄龙风景区是我国著名的风景旅游景点,位于川西高原阿坝州境内,以其独特的地理位置和地质环境而出名,黄龙沟因为冰雪融水和山顶的自流冷水型泉眼的水流而在地表面形成的一层钙华,成为一道靓丽的风景。在黄龙风景区钙华的形成和退化过程中,微生物在此过程中扮演着重要角色,同时黄龙受到海拔高、缺氧、低温、日照长和高辐射等因素的影响,具有独特的微生物多样性组成。因此,研究黄龙风景区中水体微生物群落结构及多样性具有重要意义,更为进一步保护黄龙风景区独特的地质环境提供科学依据。本文在黄龙风景区采集了16个水样,通过DGGE技术分析全部水样中细菌多样性,16S rDNA文库技术分析了其中4个样品,从低到高分别是龙泉眼(HL15)、金山铺地(HL10)、争艳彩池(HL05)及五彩池(HL02)4个水体中细菌群落结构及多样性。454测序分析迎宾池(HL17)水体中的细菌群落结构及多样性,研究的结果如下：1、用PCR-DGGE对黄龙风景区中16个水体样品进行了DGGE图谱分析。结果显示,多样性指数(H)在2.628-3.323之间,丰度(S)在14-28之间。相似性矩阵图表明,样品间相似性在29.8%-72.1%之间,其中相似性在60%以上的占32.50%。通过UPGAM进行聚类分析,所有的样品在相似性在40%处聚在一起,细菌群落相似性最高的是样品16和17,达到72%。综上说明,黄龙风景区水体中具有丰富的细菌多样性。2、从高到低选取出黄龙五彩池(HL02)、争艳彩池池(HL05)、金沙铺地(HL10)、龙泉眼(HL15)4个地方的的水体进行细菌16S rDNA文库构建。分别挑取了102、139、121、141个克隆子,经RFLP分析,挑取了214个OTU测序,覆盖率C分别是77.46%、74.64%、81.81%、63.82%。经16S rDNA测序分析。分别属于10个大的类群。变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、酸杆菌门(Acidobacteria)厚壁菌门(Firmicutes)、浮霉菌门(Planctomycetales)、蓝藻门(Cyanobacteria)、异常球菌-栖热菌门(Deinococcus-Thermus)、绿弯菌门(Chloroflexi)、疣微菌门(Verrucomicrobia)。其中,变形菌门是优势类群。经过多样性指数(H)和物种丰富度指数(Schao1)的计算结果表明,龙泉眼的细菌多样性最丰富,五彩池的最低。3、根据DGGE图谱和文库分析,选取黄龙风景区迎宾池(HLGH17)用454测序技术分析水体中细菌多样。454利用16S rDNA V4-V5片段测序分析,共得到12090条序列,OTUs有5429个。覆盖率C为67.7%。使用RAD数据库比对,分别属于14个细菌类群,变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、酸杆菌门(Acidobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、浮霉菌门(Planctomycetales)、蓝藻门(Cyanobacteria)、异常球菌-栖热菌门(Deinococcus-Thermus)、绿弯菌门(Chloroflexi)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、绿菌门(Chlorobi)、Armatimonadetes及衣原体门(Chlamydiae),还有12.59%的未知菌。其中变形菌门是优势类群,其次是拟杆菌门和蓝细菌门。以上结果表明,通过以上免培养技术反应了黄龙风景区水体中细菌群落结构及多样性丰富。