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本研究旨在完善静脉一次注射小剂量[3H]Leu测定家禽内源氨基酸损失量的方法。本方法是针对静脉连续灌注同位素标记动物法的不足而提出的。一次注射法的基本设想是,依据单代谢区理论、内源AA来源和分布规律以及同位素示踪的原理,认为排泄物中内源Leu比放射性强度(SRe)随血浆游离Leu比放射性强度(SRp)呈等比例变化。因此,不同饲粮间SRe/SRp近似相等。据此,可由无氮饲粮(NFD)的SRe/SRp之值估计实际含氮饲粮的SRe值,进而推算内源Leu排泄量。本研究分三步进行:(1)不同饲粮时排泄物中内源Leu与血浆游离Leu比放射性强度之比相等的可能性证明。选择24只BW相近(1.5kg左右, BW)的尼克红蛋青鸡,随机分为4个处理,每个处理3个重复,每重复2只鸡。除绝食组外,分别饲喂NFD饲粮以及分别以豆粕、棉粕为唯一氮源的饲粮(CP为20%)。正式绝食或强饲后,立即静脉注射30μci[3H]Leu/kg WB(1ml/kg BW),分别于注射后5min、30min、4hr、24hr、36hr、48hr翅静脉采血,注射后开始准确无损收集排泄物48hr,测定各时间点的去蛋白血浆比放射性强度及48hr内排泄物的比放射性强度,通过强饲不同饲粮时,去蛋白血浆与排泄物内源Leu比放射性强度间的比例,证明SRei/SRpi =K成立(K为常数)(2)在(1)的基础上,推算出实际含氮饲粮条件下的内源AA损失量。以NFD的AA模式为内源AA模式,用K值推算出强饲两种CP为20%的饲粮时的各AA的内源损失量。(3)通过微积分分析,推算出最佳采血时间,简化该方法的操作程序,降低成本。试验的主要结果如下:<WP=4>(1)本研究进一步表明一次注射法具有一定的可行性。由于绝食组和NFD组排泄物中检出的AA全部为内源氨基酸,这两种处理48hr排泄物中内源Leu比放射性强度与相应血浆游离Leu比放射性强度的48hr内定积分值之比分别为0.0643±0.0012和0.0678±0.0008,经检验差异不显著(P>0.05),从而证明SRe/SRp=K的成立。(2)一次注射法可以较为准确测定实际含氮饲粮时的内源AA损失量。一次注射法检测的两种CP20%实际含氮饲粮时的总AA内源损失量分别比NFD法高52.07%(豆粕组)和34.21%(棉粕组),而且这两种饲粮组的48hr内源AA损失总量分别为25081.94mg/kg DMI(豆粕组)和22136.00mg/kg DMI(棉粕组),经检验差异不显著(P>0.05),表明在相同蛋白质水平条件下,试验动物内源氨基酸的损失量趋于恒定。(3)通过微积分分析,最佳采血时间应为静脉注射同位素[3H]Leu后35hr。