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中华鳖(Pelodiscus sinensis)是我国重要的淡水养殖动物,对其免疫系统的研究不仅在脊椎动物发育与比较免疫学方面具有重要意义,而且在中华鳖病害防治方面也具有重要的价值。本论文对编码中华鳖免疫球蛋白连接链(Joining chain)和免疫球蛋白M、D、Y的重链cDNA进行克隆,并揭示这些抗体的表达规律。此外,对中华鳖IgM、IgD和IgY阳性细胞的发生进行了研究。用RACE-PCR方法扩增出中华鳖免疫球蛋白J(Joining chain)链全长cDNA。其cDNA全长为2,347 nt,包含5′非编码区30 nt,3′非编码区1,834 nt,开放阅读框480 nt,编码160个氨基酸。序列比对分析表明中华鳖免疫球蛋白J链基因与海龟的相似性高达80.7%,与鸡、爪蟾、牛蛙和鳐的相似性分别是71.3%、57.6%、49.4%和35.8%。结合进化树的结果分析,表明中华鳖免疫球蛋白J链基因同鸡的亲缘关系高于同两栖类的关系。用RT-PCR方法,检测到J链基因在中华鳖胚胎受精后5天就有表达,而且持续增加。免疫印迹实验和免疫组化分析表明J链基因组成型表达于中华鳖免疫器官和组织中。荧光定量PCR显示灭活的Aeromonas hydrophila strain T4可诱导中华鳖免疫球蛋白J链mRNA在脾脏、肾脏和血液中有较高的上调表达,表明免疫球蛋白J链基因在中华鳖早期发育阶段和抵抗微生物感染免疫应答过程中具有重要作用。到目前为止,只有三种免疫球蛋白分子IgM、IgD和IgA在爬行动物中报道。本研究中,我们克隆了中华鳖IgM、IgD和一种新的免疫球蛋白分子IgY,其中IgM和IgY同其它物种的相应的Ig分子具有相似的特征,而IgD分子结构不同于其它物种,由6个不重复的恒定区组成。利用RT-PCR检测到IgM和IgD基因在中华鳖胚胎受精后7天就有表达,而且表达量随着发育持续增加。但IgY在孵化后90天才在脾脏和肾脏中检测到微弱的表达。通过免疫印迹实验,在中华鳖主要免疫器官和组织中都检测到三种免疫球蛋白分子IgM、IgD和IgY的表达。免疫组化检测到中华鳖主要免疫器官,如脾脏、肾脏和肠中均有IgM、IgD和IgY阳性细胞。而且,实时荧光定量PCR和间接ELISA分析了灭活嗜水气单胞菌A.hydrophila诱导后中华鳖脾脏、肾脏和血液中各类Ig基因转录水平和血靖中IgM、IgD和IgY抗体表达水平的变化,结果显示均有较高的表达上调。利用流式细胞术分析发现只有IgM在脾脏、肾脏和外周血白细胞中有较高的阳性比例。原位杂交检测到IgM阳性细胞首先在孵化后18天出现在中华鳖脾脏中,随后在28天和64天的肾脏和肠中检测到,而IgD和IgY阳性细胞出现时间要晚于IgM。