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背景和目的流行于我国南方的鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)分化程度低,易发生转移。以顺铂(cisplatin,DDP)为主的联合化疗是目前治疗局部晚期或复发转移鼻咽癌的主要方案,同期放化疗较单纯放疗明显提高局部晚期鼻咽癌治愈率,姑息性化疗能延长晚期鼻咽癌患者的生存期。但是顺铂方案的毒副反应大,限制其剂量强度的提高。而且鼻咽癌细胞对顺铂等化疗药物产生原发或继发性耐药、进一步发生远处转移是导致鼻咽癌患者死亡的重要原因。生物靶向药物与传统的治疗模式相结合是目前探索进一步提高进展期鼻咽癌疗效的路径之一。研究表明包括鼻咽癌在内的许多上皮源性恶性肿瘤高表达表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),特异性靶向EGFR的单克隆抗体——西妥昔单抗(Cetuximab,C225)与放疗联合治疗局部晚期头颈部癌起显著的放射增敏、协同效应,而C225与化疗联合治疗含铂方案化疗失败的进展期鼻咽癌的临床研究结果还存在争议。本实验中我们分析C225以不同序贯方式联合DDP作用人鼻咽癌HNE1亲代和顺铂耐药细胞株HNE1/CDDP的疗效,并探讨C225对鼻咽癌细胞转移能力以及对内皮细胞在低生长因子人工基质(growth factor reduced matrigel,GFR-matrigel)上形成小管样结构的影响。方法以人鼻咽癌HNE1亲代和能稳定生长于1μg/ml顺铂的耐药细胞株HNE1/CDDP,以及人脐静脉内皮细胞株CRL-2480(HUVEC-12)作为研究对象。第一部分:1、免疫细胞化学染色法检测HNE1和HNE1/CDDP细胞EGFR的表达;2、采用MTT法和克隆形成法检测C225单药或与DDP联合对HNE1和HNE1/CDDP细胞的生长抑制作用,并分析联合用药的效应。第二部分:1、MTT法、Transwell侵袭小室和细胞迁移实验,分别测定C225对HNE1和HNE1/CDDP细胞与人工基质(matrigel)的粘附能力、侵袭能力和迁移能力的影响;2、免疫细胞化学染色法检测CRL-2480细胞EGFR的表达情况;3、小管样结构形成实验,了解C225对CRL-2480细胞在GFR-matrigel上形成小管样结构直接和间接的影响。结果第一部分:1、HNE1和HNE1/CDDP细胞均高表达EGFR。2、C225对HNE1和HNE1/CDDP细胞均有生长抑制作用。但在1～200μg /ml范围内,C225对细胞的生长抑制作用不呈剂量依赖性;对HNE1和HNE1/CDDP细胞的最大生长抑率分别为:(28.17±3.47)%和(17.65±1.73)%;C225对HNE1的生长抑制作用比对HNE1/CDDP的生长抑制作用较大。3、10或80μg/ml C225与不同浓度的DDP联合作用HNE1和HNE1/CDDP细胞,无论先C225后DDP还是先DDP后C225的序贯联合用药方式,C225联合低于或接近IC50浓度的DDP时均呈现相加作用;C225联合远超过IC50浓度的DDP时则表现为次于相加作用。第二部分:1、在C225作用下,HNE1和HNE1/CDDP细胞在matrigel上的粘附数量减少,与对照组比较差异有显著性(P值均<0.05)。C225使HNE1和HNE1/CDDP的侵袭细胞数减少,与对照组比较差异有显著性(P值均<0.01)。C225使HNE1和HNE1/CDDP细胞向损伤区迁移的距离减少,与对照组比较差异有显著性(P值均<0.05)。2、CRL-2480细胞表达EGFR。3、C225使CRL-248O细胞在GFR-matrigel上形成小管的长度明显缩短,对照组小管长度390±20μm,C225直接作用组小管长度341±15μm(t=5.567, P=0.000)。C225通过影响HNE1分泌对小管形成的间接作用不明显(t=1.602, P=0.14)。结论1、HNE1、HNE1/CDDP和CRL-2480细胞均高表达EGFR。2、C225单药对HNE1和HNE1/CDDP的生长有较温和的抑制作用。3、C225联合低于或接近IC50浓度的DDP时均呈现相加作用;C225联合远超过IC50的DDP时则表现为次于相加作用。联合用药的效应不受序贯用药的顺序影响。C225不能逆转HNE1/CDDP细胞对DDP耐药。4、C225能减弱HNE1和HNE2/CDDP细胞对matrigel的粘附、侵袭能力和迁移能力。5、C225能直接作用、影响CRL-2480细胞形成小管样结构;C225通过影响HNE1细胞分泌,对CRL-2480细胞形成小管样结构的间接作用不明显。