【摘 要】
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[目的]通过研究TLR4在鼻咽癌中的表达特征与肿瘤干细胞干性及其迁移和侵袭能力的关系。为鼻咽癌早期诊断、生物靶向治疗提供实验和理论基础。[方法]选用鼻咽癌5-8F细胞系和CNE2细胞系,运用无血清悬浮成球法进行培养,依据肿瘤干细胞表达的不同表面标志物富集鼻咽癌肿瘤干细胞。随后检测TLR4在富集的鼻咽癌干样细胞中的表达水平及其特征。运用流式细胞术分选鼻咽癌TLR4阳性和鼻咽癌TLR4阴性的亚细胞群。
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[目的]通过研究TLR4在鼻咽癌中的表达特征与肿瘤干细胞干性及其迁移和侵袭能力的关系。为鼻咽癌早期诊断、生物靶向治疗提供实验和理论基础。[方法]选用鼻咽癌5-8F细胞系和CNE2细胞系,运用无血清悬浮成球法进行培养,依据肿瘤干细胞表达的不同表面标志物富集鼻咽癌肿瘤干细胞。随后检测TLR4在富集的鼻咽癌干样细胞中的表达水平及其特征。运用流式细胞术分选鼻咽癌TLR4阳性和鼻咽癌TLR4阴性的亚细胞群。运用细胞功能学实验检测TLR4的表达与鼻咽癌肿瘤干细胞自我更新、增殖的关系。运用划痕实验和侵袭实验,检测TLR4表达与鼻咽癌肿瘤干细胞细胞迁移、侵袭能力的关系。运用Q-PCR实验评估TLR4表达水平与细胞干性相关基因的表达关系。[结果]1.鼻咽癌肿瘤干细胞成球实验过程中,可以观察到鼻咽癌CNE2细胞相对于鼻咽癌5-8F细胞的成球能力较强,细胞球的形态较圆且结构致密。Q-PCR检测结果表明,无血清悬浮培养法培养富集的鼻咽癌肿瘤干细胞（CNE2-CS）与鼻咽癌初始的CNE2相比较,干细胞表面标记物（CD24、CD133、CD44）、干性转录基因（OCT4、Nanog、SOX2）和TLR4的表达水平相对较高。两组之前比较差异显著（P<0.05）2.鼻咽癌CNE2细胞在经过流式细胞仪分选后,TLR4阳性细胞占50.2%。分选后的TLR4阳性细胞经Q-PCR检测结果显示,干细胞的表面标志（CD24、CD44、CD133）和干性转录基因（OCT4、Nanog、SOX2）的表达表达水平相较于TLR4阴性细胞显著增加。3.无血清悬浮培养实验显示,CNE2/TLR4+细胞比CNE2/TLR4-细胞自我更新能力更强。Edu增殖实验显示,CNE2/TLR4+细胞比CNE2/TLR4-细胞增殖能力强。CNE2/TLR4+细胞在划痕愈合实验和侵袭实验中都表现出了比CNE2/TLR4-更强的迁移和侵袭能力。[结论]1.TLR4在鼻咽癌肿瘤干细胞内高表达。2.TLR4阳性的鼻咽癌细胞中含有更多的干细胞。TLR4有可能作为鼻咽癌肿瘤干细胞的标志物。3.TLR4的表达对于维持鼻咽癌肿瘤干细胞的自我更新、增殖、迁移等干性特征具有重要作用,靶向TLR4信号通路可能是治疗鼻咽癌的一种有效方法。
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