第一部分Cav1.3钙离子通道蛋白在大鼠耳蜗中的表达模式目的：研究Cav1.3钙离子通道蛋白在成年大鼠耳蜗组织中的表达和分布，了解其在听觉生理和病理中的作用。方法：应用免疫组织化学的方法检测Cav1.3钙离子通道蛋白在耳蜗组织中的分布，采用免疫印迹技术（westernbloting，WB）以及逆转录聚合酶链反应（reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR）检测Cav1.3钙通道蛋白在耳蜗不同组织间的表达情况。结果：免疫化学方法显示Cav1.3钙通道蛋白主要分布在成年大鼠毛细胞、螺旋神经节细胞、螺旋神经板缘细胞、血管纹细胞以及螺旋韧带上。RT-PCR以及WB的结果显示Cav1.3钙通道蛋白表达具有一定的组织特异性，在耳蜗和肾脏组织中均有表达，其中耳蜗组织中基底膜上最多，螺旋神经节次之，血管纹和前两者相比其表达的量相对较少。结论：初步揭示了Cav1.3钙通道蛋白在成年大鼠耳蜗不同组织中的分布和表达差异，为进一步的研究Cav1.3钙离子通道蛋白在听觉生理和病理中重要的作用提供了理论依据。第二部分Cav1.3钙离子通道蛋白的年龄相关性表达下调与老年性耳聋的研究目的:研究Cav1.3钙离子通道蛋白在老年性耳聋小鼠耳蜗组织中的表达，探讨其在老年性耳聋发病中的作用。方法:培育4w,14w,24w,48w不同年龄段的C57/6J小鼠为实验对象，应用听性脑干反应（auditorybrainstemresponse，ABR）分别检测4、14、24、48周龄的C57BL/6小鼠的听力。免疫荧光方法观察Cav1.3在不同周龄小鼠内耳组织中的分布，采用免疫印迹技术（westernbloting，WB）检测Cav1.3蛋白在不同年龄小鼠内耳中表达。同时采用实时荧光定量PCR（Real-timeRT-PCR）检测其基因（CACNA1D）mRNA在内耳组织的年龄相关性表达。结果:Cav1.3主要分布在小鼠耳蜗内外毛细胞、螺旋神经节、螺旋韧带、血管纹、螺旋（板）缘细胞。14、24、48周龄小鼠与4周龄小鼠相比ABR反应阈值明显提高（p<0.05），48周龄C57小鼠同前三组小鼠相比，ABR反应阈值显著提高（p<0.01）。随着鼠龄的增长，Cav1.3表达含量逐渐减少（p<0.01）。结论：老年性耳聋小鼠Cav1.3钙离子通道蛋白表达含量随年龄增长而减少，其功能的异常和缺失可能在老年性耳聋的发病中起一定的作用。第三部分缝隙连蛋白26(Connexin26)在听觉功能中的作用及耳聋机制的研究目的:研究Connexin26在听觉功能以及内耳主动听觉机理中的作用，探讨Connexin26缺失引起耳聋的机制。方法:运用loxP-Cre技术敲除耳蜗DCs和OPCs上的缝隙连蛋白26(Cx26)的表达。由Cx26loxP/loxP转基因鼠和Prox1-CreERT2小鼠杂交培育缝隙连蛋白26选择性敲除小鼠（以下简称Cx26cKO小鼠）。分别检测野生型、杂合子以及纯合子不同基因型小鼠听性脑干反应（auditorybrainstemresponse，ABR）、微音器电位（CM）、畸变耳声发射（DPOAE）、内淋巴电位（EP）。免疫组织化学的方法检测Cx26、Cx30以及外毛细胞电能动性蛋白Prestin的表达。甲苯氨蓝染色观察不同基因型小鼠螺旋神经节差异。采用实时荧光定量PCR（Real-timeRT-PCR）检测Prestin在野生型和纯合子小鼠的表达。结果:在缝隙连蛋白26选择性敲除小鼠耳蜗顶回、中回及底回的Deiters’细胞和外柱细胞上均没有Cx26的表达。Cx26在耳蜗其他组织如螺旋缘以及外侧壁的表达正常。而另外一种连接蛋白Cx30在耳蜗组织中的表达也正常。Cx26cKO小鼠有听力损失，听性脑干反应阈值增加以及DPOAE降低，但是微音器电位和内淋巴电位均正常。外毛细胞电能动性蛋白Prestin的表达也并无异常，内耳的毛细胞和螺旋神经节也未发现明显的损失和退变。结论：耳蜗主动放大机理依赖于支持细胞的缝隙连接。缝隙连蛋白26功能的缺失可以减弱耳蜗放大器的功能从而引起听力的损失。