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目的:研究人类脂肪组织来源成体干细胞(hADASc)体外分离、培养及表面抗原分子特征；研究人类脂肪组织来源成体干细胞(hADASc)体外培养的生物学特征及供体年龄对其生长增殖的影响；探讨将编码TGF-β1的PGL3-TGFβ1重组质粒转染人类脂肪组织来源干细胞，细胞通过自分泌作用，定向诱导向软骨细胞分化的可行性，为进一步“基因加强组织工程学”修复软骨损伤研究提供一定的体外实验依据，从实验室阶段客观评价其向软骨细胞定向诱导分化的可行性和能力，为在体研究和临床研究、应用奠定实验室研究基础。
方法：
1．不同年龄组志愿者(<20岁、21～40岁，41～60岁和>61岁，共4个年龄组)，手术切除少量皮下脂肪组织，0．075﹪I型胶原酶37℃酶消化，100run滤网过滤、洗涤，接种在25cm<2>培养瓶中，24小时后观察，予换液弃去原始培养基和漂浮细胞，连续培养，3天换液一次，细胞融合率达到约80﹪时，1:250胰蛋白酶消化，按照1:2～3比例传代培养，传至20代；
2.取培养第3代细胞，流式细胞仪检测细胞表面抗原标记物(CD29，CD34，CD44，CD45，CD49d，HLA-DR，CD106)和细胞周期；
3．细胞培养传20代后进行细胞染色体组分析；
4．MTT。法分别检测各年龄组不同时间点吸光值，绘制生长曲线，计算人类脂肪来源干细胞倍增时间(Time Doubling，TD)；
5.鉴定PGL3-TGFβ1重组质粒，Kpn I和Nhe I内切酶双酶切消化，水平分离电泳，DNA测序，Blast软件在GenBank上进行序列比对鉴定；
6．运用脂质体(FuGENE 6)转染方法，将PGL3-TGFβ1重组质粒转染人类脂肪组织来源干细胞，绘制转染后细胞的生长曲线，检测Luceferase活性，MTT法(490nm波长)检测转染细胞和未转染细胞的吸光值，评价转染对细胞生长活力的影响；
7.转染后人类脂肪组织来源干细胞，进行细胞的TGF-β1基因RT-PCR检测，以培养的P3代未转染外源基因的人类脂肪来源干细胞以常规体外培养为对照组；
8.制备细胞爬片，在培养的第9天，进行抗II型胶原的免疫组织化学染色(SABC法)分析。
结论：
1、结合酶消化法和贴壁筛选法，自少量人类皮下脂肪组织可体外分离培养出具有干细胞特征的有核组织细胞，连续传代20代以上遗传特性稳定；
2、供体年龄对人类脂肪组织来源干细胞体外培养生长活力具有一定的影响作用，青年来源细胞生长活力强于老龄供体来源的细胞；
3、hADASc细胞间充质干细胞标志：CD 29(+)CD 44(+)；造血干细胞标记物CD 34(-)和CD 45(-)；成纤维细胞来源标记HLA-DR(-)；CD 106(-)，CD49d(±)
4、脂质体法将PGL3-TGF β1重组基因转染hADASc，细胞内表达TGF-β1，但对细胞生长活力有一定影响，转染后细胞生长活性下降；
5、转染细胞自分泌TGF-β1，连续培养9天，hADASc表现出软骨细胞分泌II型胶原蛋白的特性，与外源性TGF-β1作用相类似；
6、人类脂肪组织来源成体干细胞(hADASc)具有取材方便、来源广泛、体外增殖活跃和定向诱导分化能力的特点，可望成为软骨组织工程学研究的种子细胞。