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【目的】葡萄膜黑色素瘤是最常见的原发性眼内恶性肿瘤之一,脉络膜是其最常发生的部位,称为脉络膜黑色素瘤(Choroidal Melanoma,CM)。目前,该病治疗最常用的方法仍为眼球摘除术,但术后是否能有效提高患者的相对生存率,仍存在较大争议。因此,该肿瘤是严重影响人类健康的疾病。由于脉络膜黑色素瘤的发病机制至今尚未被完全阐明,导致临床疗效欠佳。MicroRNAs(miRNAs)是生物界存在的微小单链非编码RNA,其主要功能是调节基因转录后的表达。成熟miRNA通过与特殊的靶向mRNA粘附,从而触发mRNA的降解或抑制蛋白质的翻译。研究表明,大多数miRNAs与细胞自身的代谢活动息息相关,并且参与人类肿瘤的发生发展过程,而异常miRNAs分子通常作为致癌因子或抑癌因子出现,调控着各种人类肿瘤的发生。骨硬化蛋白(Sclerostin)是骨形成过程中起负调节作用的因子,它由Sost(Sclerosteosis,Sost)基因指导编码而成,是经典Wnt信号传导通路的抑制剂。有研究发现,过表达的Sost可促进Wnt信号传导驱动前列腺癌骨转移倾向和侵袭。基于以上观点,本课题旨在探讨脉络膜黑色素瘤的发病机制,了解其潜在的信号传导通路,进一步探索Sost基因敲低后,脉络膜黑色素瘤细胞的增殖和迁移功能的变化,及其潜在的分子调控机制。【方法】利用细胞体外培养技术培养人眼脉络膜黑色素瘤细胞(MUM-2C);取对数生长期的MUM-2C细胞并随机分为两组,其中一组转染人Sost干扰慢病毒,构建Sost基因敲低的稳转细胞系(Sost-knockdown组),另一组不进行Sost基因敲低处理,作为阴性对照(Sost NC组)。使用CCK-8试剂盒,检测该两组细胞的增殖活性;使用细胞划痕技术,检测该两组细胞的迁移运动量;使用mi RNAs抽提试剂盒提取Sost-kockdown和Sost NC两组细胞中的mi RNAs,进行基因测序,根据测序结果找出差异性miRNAs,再根据KEGG富集分析,筛选出在Sost基因调控的Wnt/β-catenin通路中发生显著变化的miRNAs,进行目的miRNA的选择;使用实时荧光定量PCR技术,检测该两组细胞中目的miRNA(microRNA-744-5p)分子含量的变化。使用RT-qPCR技术和Western Blot技术,分别检测该两组细胞中β-catenin蛋白的含量及表达。取生长对数期的MUM-2C细胞并随机分为两组,分别转染miRNA模拟物(micro RNA-744-5p-mimics)及其阴性对照(mimics-NC);使用RT-qPCR技术和Western Blot技术,分别检测转染后两组细胞中β-catenin蛋白的含量及表达。【结果】CCK-8法结果表明,随着时间的增长,Sost-knockdown和SostNC两组的增殖活性均有所增加,在同一时间点内,Sost-knockdown组细胞的增殖活性显著低于SostNC组(P<0.05);划痕试验结果显示,与0h相比,Sost-knockdown组细胞在24h时的迁移量明显低于SostNC组。根据Sost-knockdown和SostNC两组细胞的miRNAs基因测序结果,在Sost基因调控的Wnt/β-catenin通路上,筛选出差异性较大的microRNA-744-5p分子量作为目的miRNA;RT-qPCR检测结果表明,Sost-knockdown组细胞中micro RNA-744-5p分子含量显著低于Sost NC组(P<0.05);RT-qPCR及Western Blot结果显示,Sost-knockdown组细胞中β-catenin蛋白的含量显著低于Sost NC组(P<0.05),表达水平也明显低于SostNC组;MicroRNAs转染后RT-q PCR及Western Blot结果显示,MUM-mimics组细胞中β-catenin蛋白mRNA的含量显著高于MUM-NC组(P<0.05),表达水平也明显高于MUM-NC组。【结论】当通过人Sost慢病毒转染技术敲低Sost基因后,脉络膜黑色素瘤细胞的增殖活性显著降低,迁移运动能力也明显降低;细胞中microRNA-744-5p分子量显著下调;细胞中Sost基因调控的Wnt/β-catenin信号传导通路上β-catenin蛋白的含量显著降低,表达也明显降低。当过表达microRNA-744-5p分子后,脉络膜黑色素瘤细胞中Sost基因调控的Wnt/β-catenin信号传导通路上β-catenin蛋白的含量显著增加,表达也明显增加。