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目的本研究通过化学诱导剂氧化偶氮甲烷(AOM)联合葡聚糖硫酸钠盐(DSS)建立炎症相关性结肠癌小鼠模型,为后续实验研究奠定动物模型基础,同时初步探究红木生育三烯酚对结肠癌小鼠外周血T淋巴细胞、IL-6、IFN-γ的影响。方法1.AOM-DSS诱导的炎症相关性结肠癌小鼠模型的建立实验动物按体重随机均分为4组,每组15只,溶剂对照组、DSS低分子量组、DSS高分子量组和DSS低分子量+DSS高分子量组。结肠癌造模动物腹腔注射氧化偶氮甲烷AOM(10mg/kg.BW)一次,一周后给予含3%致炎剂葡聚糖硫酸钠(DSS)蒸馏水连续饮用7天,换蒸馏水连续饮用14天,含2%DSS蒸馏水连续饮用5天,蒸馏水连续饮用16天,含2%DSS蒸馏水连续饮用5天,蒸馏水连续饮用。溶剂对照组腹腔注射与AOM同体积生理盐水,连续饮用蒸馏水直至造模第20周结束。每天观察并记录动物毛发、粪便性状及是否出现肉眼可见血便,每周记录动物体重1次。造模第20周结束时摘眼球取血,颈椎脱臼处死小鼠,取动物脾脏称量并记录脏器系数。取由肛门至盲肠末端的全部结直肠,沿结肠带垂直剖开直结肠,用生理盐水冲洗后观察肠道内病变情况,计数肿瘤形成个数,HE染色观察动物结肠组织和脾组织的病理学改变。2.红木生育三烯酚对AOM-DSS诱导的结肠癌小鼠外周血T淋巴细胞和细胞因子的影响将实验动物按体重随机均分为5组,每组15只,包括1个溶剂对照组和4个结肠癌造模组,结肠癌造模组又分别包括肿瘤模型对照组、低剂量红木生育三烯酚组、中剂量红木生育三烯酚组和高剂量红木生育三烯酚组。溶剂对照组和肿瘤模型组每天经口给予大豆油灌胃0.1mg/kg.BW,低、中、高生育三烯酚实验组分别经口灌胃给予δ-生育三烯酚当量为5mg/kg.BW、10mg/kg.BW、20mg/kg.BW的红木生育三烯酚。实验动物灌胃1周后,结肠癌造模组动物腹腔注射氧化偶氮甲烷(AOM)10mg/kg.BW一次,一周后给予3%致炎剂葡聚糖硫酸钠(DSS分子量为36000-50000MW)连续饮用7天,换蒸馏水连续饮用14天,2%DSS连续饮用5天,蒸馏水连续饮用16天,2%DSS连续饮用5天,蒸馏水连续饮用。溶剂对照组腹腔注射AOM同体积生理盐水,连续饮用蒸馏水直至造模第20周结束。每天观察动物毛发、粪便性状及是否出现肉眼可见血便并记录,每周记录动物体重1次。造模第20周结束时摘眼球取血,颈椎脱臼处死小鼠,取动物组织(胸腺、肝脏、双肾、脾脏)称量并记录脏器系数。取由肛门至盲肠末端的全部结直肠,沿结肠带垂直剖开直结肠,用生理盐水冲洗后观察肠道内病变情况,计数肿瘤形成个数,HE染色观察动物结肠组织和脾组织的病理学改变。全自动血液分析仪测定全血血液学指标;流式细胞仪检测外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+T与CD8+T比率;ELISA方法检测外周血细胞因子IL-6、IFN-γ的含量。结果AOM-DSS诱导炎症相关性结肠癌小鼠模型的建立:1.小剂量、单次腹腔注射AOM(10mg/kg.BW)联合2-3%DSS(分子量为36000-50000MW)饮水,3个循环,20周后,可以诱导CD-1(ICR)小鼠肠粘膜增厚、皱襞紊乱,结肠远端肿瘤生长,并且肿瘤形成率为100%。2.AOM/DSS模型诱导小鼠肠粘膜出现不同程度的增厚,皱襞紊乱,可观察到个数不等大小不一的结直肠肿瘤生长。肉眼可见生成的肿瘤向肠腔内突出,部分小肿瘤相互融合成大肿瘤,形成肿瘤数量多时肿瘤相互连接,形成片状。HE染色,镜下病理观察结果显示,黏膜层及黏膜下层出现广泛的炎症细胞浸润;层内可观察到腺管样结构,具有组织异型性;腺体组织结构紊乱、被破坏。形成的肿瘤包括从低级别上皮内瘤变到高级别上皮内瘤变的病理改变,且肿瘤的发展全部在原位癌阶段,未见浸润性癌的形成。3.AOM/DSS模型小鼠脾肿大,脾脏系数增大。HE染色可见多核巨细胞增多,红髓消失,髓外造血。红木生育三烯酚对AOM-DSS诱导的结肠癌小鼠外周血T淋巴细胞和细胞因子的影响:1.肿瘤模型对照组小鼠平均体重低于溶剂对照组,且在给予DSS饮水后平均体重较前一周有降低趋势。5mg/kg.BW、10mg/kg.BW、20mg/kg.BW红木生育三烯酚组小鼠平均体重高于肿瘤模型对照组,低于溶剂对照组。2.肿瘤模型对照组白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、红细胞比积、血小板、嗜酸性粒细胞与溶剂对照组相比下降,差异有统计学意义(P<0.05)。5mg/kg.BW生育三烯酚组白细胞计数、中性粒细胞与溶剂对照组相比下降,差异有统计学意义(P<0.05)。10mg/kg.BW、20mg/kg.BW红木生育三烯酚组白细胞计数、红细胞计数、与溶剂对照组相比下降,差异有统计学意义(P<0.05)。3.10mg/kg.BW、20mg/kg.BW红木生育三烯酚组能显著提高结肠癌小鼠外周血CD4+/CD8+比率;20mg/kg.BW红木生育三烯酚组能显著提高结肠癌小鼠外周血IFN-γ表达量;10mg/kg.BW、20mg/kg.BW红木生育三烯酚组能显著降低结肠癌小鼠外周血IL-6表达量,与肿瘤模型对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论1.小剂量(10mg/kg.BW)、单次腹腔注射AOM联合2-3%DSS(分子量36000-50000MW)饮水3个循环,20周后,可以成功诱导CD-1(ICR)小鼠发生结肠肿瘤,并且肿瘤形成率为100%。2.红木生育三烯酚能调节肿瘤相关免疫细胞和细胞因子的表达,改善AOM/DSS诱导的结肠癌小鼠异常的免疫状态,调节免疫失衡。