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背景及目的:骨肉瘤(osteosarcoma, OS)是骨骼系统最常见的恶性肿瘤,常发生于儿童和青少年。结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)最初在原发性和转移性的结肠癌样本中鉴定,并被证实为转移形成和无转移生存率的独立预后因子。许多研究表明其作用机制可能是与很多肿瘤相关的信号途径交汇作用共同调控肿瘤的增殖、分化、凋亡和转移。本研究旨在探讨骨肉瘤中MACC1表达、调控、分子机制及其临床意义。方法:(1)采用免疫组织化学检测骨肉瘤组织和正常骨组织中MACC1蛋白的表达;采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR技术分别检测不同临床阶段、不同转移状态以及新鲜的骨肉瘤组织中MACC1mRNA的相对表达水平,并应用Kaplan–Meier存活曲线分析MACC1与骨肉瘤病人预后的关系。(2)采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测人骨肉瘤细胞系(MG-63、HOS、SaOS-2和U2OS)以及人成骨细胞hFOB1.19中MACC1mRNA和蛋白的表达水平;应用分子克隆技术构建真核表达载体pcDNA-MACC1,并转染骨肉瘤MG-63细胞,同时将MACC1siRNA和对照siRNA也转染骨肉瘤U2OS细胞;实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测不同处理骨肉瘤细胞中MACC1mRNA和蛋白水平;CCK-8检测细胞的增殖能力;软琼脂克隆形成实验分析细胞的克隆形成能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化;荧光底物(Ac-DEVD-AMC)检测细胞中caspase-3活性;Western blotting检测细胞Akt信号途径中关键组分p-Akt和总Akt以及其下游靶基因E-cadherin、MMP-2和MMP-9的表达水平。(3)将不同处理的MG-63和U2OS细胞皮下接种裸鼠,建立骨肉瘤裸鼠移植瘤模型;监测肿瘤大小,汇制肿瘤生长曲线,称量肿瘤重量,评估其对增殖的影响;Western blotting技术检测不同骨肉瘤裸鼠移植瘤中MACC1蛋白的表达;免疫组织化学评估不同骨肉瘤裸鼠移植瘤中Ki-67增殖指数。结果:(1)半定量RT-PCR显示骨肉瘤组织中MACC1mRNA的平均表达水平显著高于正常骨组织(P<0.01),并由实时荧光定量PCR证实;III期临床的骨肉瘤病人的MACC1mRNA相对表达水平显著高于I和II期临床的骨肉瘤病人(P<0.01),具有远端转移的骨肉瘤病人中MACC1mRNA的相对表达水平显著高于无转移的骨肉瘤病人(P<0.01);骨肉瘤组织与正常骨组织MACC1蛋白的表达差异具有统计学意义(P=0.000),并且MACC1蛋白表达与骨肉瘤病人的性别、年龄、肿瘤大小及解剖位置无关(P>0.05),但与病人的临床阶段和转移密切相关(P<0.05);进一步通过log-rank test(Mantel-Cox)分析表明,具有MACC1高表达的骨肉瘤病人的存活率显著低于MACC1低表达的骨肉瘤病人(P<0.01)。(2)骨肉瘤细胞中MACC1mRNA和蛋白的相对表达水平均显著高于人成骨细胞hFOB1.19(P<0.05);pcDNA-MACC1组中MACC1mRNA和蛋白表达水平均显著高于未处理组和空载体组(P<0.05),而MACC1siRNA组则出现相反情况(P<0.05);MACC1过表达能显著提高骨肉瘤MG-63细胞的增殖、克隆形成能力和侵袭能力,抑制细胞凋亡和降低caspase-3的活性,激活MG-63细胞中Akt信号途径,下调E-cadherin的水平和提高MMP-2和MMP-9的水平(P<0.05),而MACC1表达的下调则出现相反的结果(P<0.05);pcDNA-MACC1组中MG-63细胞在G0/G1期的细胞数比率显著低于未处理组和空载体处理组(P=0.000),S期的细胞数比率显著高于未处理组和空载体处理组(P=0.000),此外,MACC1siRNA组中出现相反情况(P=0.000)。(3)与未处理组和空载体对照组相比,pcDNA-MACC1组中的裸鼠移植瘤的重量、生长速度、MACC1蛋白的表达、Ki-67染色的阳性细胞数、细胞的增殖指数均显著升高(P<0.05),然而MACC1siRNA组中则出现相反的结果(P<0.05)。结论:MACC1的高表达在骨肉瘤的发生、发展及增殖中发挥重要作用,其高表达可能成为骨肉瘤病人恶性程度、转移及预后判定的重要分子标记,其表达水平改变介导的骨肉瘤生物学行为变化可能与Akt信号途径的活化状态密切相关,因而MACC1可能成为骨肉瘤患者治疗的新型分子靶点。