【摘 要】
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目的:研究Apelin对高盐喂食C57BL/6J小鼠肾脏纤维化的影响及ACE2-Ang（1-7）-Mas R轴在其中的作用。方法:野生型（wild type,WT）雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为对照组（WT NS组,含0.5%Na Cl饲料）,对照+Apelin组（WT NS+AP组,含0.5%Na Cl饲料,实验第14-18周腹腔注射1μg/10mg[Pyr~1]-Apelin-1
【基金项目】
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国家自然科学基金《ACE2与TGF-β1/Smad3信号对高盐介导高血压血管纤维化的调控作用》（基金号81460077）；
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目的:研究Apelin对高盐喂食C57BL/6J小鼠肾脏纤维化的影响及ACE2-Ang（1-7）-Mas R轴在其中的作用。方法:野生型（wild type,WT）雄性C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为对照组（WT NS组,含0.5%Na Cl饲料）,对照+Apelin组（WT NS+AP组,含0.5%Na Cl饲料,实验第14-18周腹腔注射1μg/10mg[Pyr~1]-Apelin-13）,高盐组（WT HS组,含8%Na Cl饲料）,高盐+Apelin组（WT HS+AP组,含8%Na Cl饲料,实验第14-18周腹腔注射1μg/10mg[Pyr~1]-Apelin-13）,每组6-10只。Ace2+/-雌鼠与WT雄鼠交配,后代进行基因型鉴定。采用随机数字表法将Ace2-/y雄鼠随机分为对照组（KO NS组）,对照+Apelin组（KO NS+AP组）,高盐组（KO HS组）,高盐+Apelin组（KO HS+AP组）,每组6-10只。每两周测量小鼠尾动脉血压。检测24h尿微量白蛋白（24h microalbuminuria,24h m ALB）、24h尿钠、尿钾排泄量,计算24h尿钠/钾比;测量血肌酐（serum creatinine,Scr）、血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）。HE、Masson染色观察小鼠肾脏形态和纤维化程度;Western blotting检测胶原I（Collagen I,Col I）、E-钙粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、血管紧张素转化酶2（Angiotensin converting enzyme 2,ACE2）、Mas受体（Mas R）的蛋白表达;ELISA法检测肾脏Ang（1-7）[Angiotensin（1-7）,Ang（1-7）]含量。结果:（1）在野生型C57BL/6J小鼠中,与WT NS相比,WT HS组小鼠血压明显升高（P＜0.05）,尿量、24h尿钠排泄量、尿钠钾排泄比、24h m ALB增高、Scr、BUN升高（P＜0.05）,24h尿钾降低（P＜0.05）。肾小球面积减小（P＜0.05）,肾小球和肾间质纤维化指数增高（P＜0.05）;Col（40）合成和分泌增加（P＜0.05）;E-cadherin、APJ、ACE2、Ang（1-7）、Mas R蛋白表达减少（P＜0.05）,α-SMA和Vimentin蛋白表达增高（P＜0.05）;与WT NS相比,WT NS+AP组小鼠APJ表达增高（P＜0.05）;与WT HS组相比,WT HS+AP组血压明显降低（P＜0.05）,24尿钠、尿钠钾排泄比、24hm ALB、Scr、BUN降低（P＜0.05）。肾小球面积增大（P＜0.05）,肾小球和肾间质纤维化指数降低（P＜0.05）;Col（40）合成和分泌减少（P＜0.05）;E-cadherin、APJ、ACE2、Ang（1-7）、Mas R蛋白表达增加（P＜0.05）,α-SMA和Vimentin表达降低（P＜0.05）。（2）在Ace2-/yC57BL/6J雄鼠中,各组小鼠血压未见升高（P＞0.05）,高盐干预尿量、尿钠、Scr、BUN明显增加（P＜0.05）;Apelin干预后,正常与高盐喂食的小鼠血压下降（P＜0.05）。与对应的野生小鼠相比,KO NS组、KO NS+AP组、KO HS+AP组小鼠,肾小球面积均减小（P＜0.05）,肾小球及肾间质纤维化指数增高（P＜0.05）;Col（40）合成和分泌增加（P＜0.05）;E-cadherin、ACE2、Ang（1-7）、Mas R蛋白表达减少（P＜0.05）,α-SMA和Vimentin表达增高（P＜0.05）,Apelin可促进KO NS和KO HS组小鼠的APJ表达（P＜0.05）,但未能改善小鼠肾脏纤维化。结论:（1）高盐饮食可使WT小鼠血压升高,肾功能降低,肾脏发生EMT导致肾脏纤维化改变,Apelin可降低高盐喂食引起的血压升高,改善肾脏纤维化。（2）Apelin改善肾脏纤维化的作用可能与Apelin/APJ和ACE2/Ang（1-7）/Mas R通路激活有关。（3）ACE2敲除通过血压非依赖的方式促进肾脏纤维化的发生。
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